陶渊喆，杨宇敏，尹 丹，张 巍，朱志杰*

（1.通化金马药业集团股份有限公司，通化 134003；2.通化市卫生学校，通化 134001）

尿素，又称脲、碳酰胺，化学式是CH4N2O，是由碳、氮、氧、氢组成的有机化合物，是一种白色晶体。最简单的有机化合物之一，是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主要含氮终产物。

1 尿素的有关物质

1.1 仪器与试药

尿素（中国食品药品检定研究院）；缩二脲（百灵威）；缩三脲（SINCO）；尿素（张家港丰达制药有限公司）；沃特世高效液相色谱仪；电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色 谱柱:Dikma Diamonsil Plus C18,（4.6mm×250mm,5μm）;流动相：水；流速：1.0ml/min；检测波长：195nm；柱温：25℃；进样量20μl。

2.2 溶液的配制

对照品溶液的制备：尿素对照品适量，精密称定，加水定量制成0.1mg/ml的溶液，作为尿素对照品贮备液。

缩二脲对照品适量，精密称定，加水定量制成0.1mg/ml的溶液，作为缩二脲对照品贮备液。

缩三脲对照品适量，精密称定，加0.05%磷酸溶液-甲醇（50∶50）定量制成0.1mg/ml的溶液，作为缩三脲对照品贮备液。

精密量取尿素对照品贮备液1ml、缩二脲对照品贮备液3ml、缩三脲对照品贮备液1ml，加水定量制成每1ml中含尿素5μg、缩二脲15μg、缩三脲5μg的溶液。

供试品溶液的制备：取本品约100mg，精密称定，置20ml量瓶中，加水溶解并稀释制成,5mg/ml的溶液，摇匀，即得。

空白溶剂：实验用水。

2.3 专属性实验

分别取混合对照品溶液、供试品溶液和空白溶剂各20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。由图可知，在本文建立的色谱条件下，尿素的保留时间3.086min、尿素中各对照品和其他组分达到了完全分离，空白溶剂无干扰。结果见图1。对照品溶液（A）、样品溶液（B）和空白溶剂（C）色谱图

图1

2.4 标准曲线

分别精密吸取尿素对照品贮备液1ml，缩二脲对照品贮备液3ml，缩三脲对照品贮备液1ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀作为线性溶液（1）；分别精密吸取尿素对照品贮备液0.5ml，缩二脲对照品贮备液1.5ml，缩三脲对照品贮备液0.5ml，置20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀作为线性溶液（2）；分别精密吸取尿素对照品贮备液1ml，缩二脲对照品贮备液3ml，缩三脲对照品贮备液1ml，置20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀作为线性溶液（3）；分别精密吸取尿素对照品贮备液1.5ml，缩二脲对照品贮备液4.5ml，缩三脲对照品贮备液1.5ml，置20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀作为线性溶液（4）；分别精密吸取尿素对照品贮备液2ml，缩二脲对照品贮备液6ml，缩三脲对照品贮备液2ml，置20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀作为线性溶液（5），精密量取20L注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，尿素在2.054~10.2695μg·mL-1范围内呈良好的线性关系，其线性回归方程为A=7697.4C-2498.9（r=0.9993），结果表明对照品在相应浓度范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验

取对照品溶液，日内连续进样3次和日间连续进样3次（连续3天，每天1次），记录色谱图的峰面积。结果表明日内，日间精密度良好。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液，分别于0、1、3、6、12h，注入液相色谱仪就，记录色谱图的峰面积，结果表明供试品溶液放置12h稳定。

2.7 重复性试验

取批号为200310的尿素6份，按供试品溶液制备方法制备并测定，记录色谱图的峰面积，RSD为0.42%。

2.8 回收率试验

精密称取已知含量的尿素100mg，共6份，依次按照2.2项下方法制备供试品溶液。取6份供试品溶液各1ml，精密加入浓度为0.103mg·mL-1尿素对照品溶液1ml，进样测定，记录色谱图，计算回收率，结果见表1。

表1 尿素回收率测定结果

3 讨论

高效液相色谱法测定有关物质试验的液相条件下，尿素与各杂质峰的分离良好，杂质含量均符合要求，切空白溶剂无干扰，表明此方法可行、可满足实验要求。