摘 要：磺胺类药物在人体内蓄积浓度超过一定值可对人体产生危害。因此，建立一种快捷、准确、高效和适用性广的磺胺类药物残留检测方法很有必要。本文建立了基体固相扩散-固相萃取-高效液相色谱-紫外检测法同时分析蜂蜜中9种磺胺类药物残留量。该方法对蜂蜜加标回收率为63.1%～105.1%，相对标准偏差为5.7%～15.2%，最低检出限为4～6 μg/kg，可用于蜂蜜中磺胺类药物残留的分析检测。

关键词：磺胺类药物;高效液相色谱法;蜂蜜

Analysis of Residues of Sulfonamides in Honey

LI Lin

（Hbgs Technical Services Co.， Ltd.， Shijiazhuang 050000， China）

Abstract： The accumulation concentration of sulfonamides in human body exceeds a certain value， which can cause harm to human body. Therefore， it is necessary to establish a rapid， accurate， efficient and widely applicable method for the determination of sulfonamides residues. A matrix solid phase diffusion solid phase extraction high performance liquid chromatography ultraviolet detection method was established for the simultaneous analysis of 9 sulfonamides residues in honey. The recovery of honey spiked by this method is 63.1%～105.1%， the relative standard deviation is 5.7%～15.2%， and the minimum detection limit is 4～6 μg/kg， which can be used for the analysis and detection of sulfonamides residues in honey..

Keywords： sulfonamides; high performance liquid chromatography; honey

隨着社会的发展，食品中重金属超标、农药、兽药和激素残留及带有致病菌等问题已引起人们的广泛关注。其中，兽药残留问题较为严重[1]。随着抗生素的应用越来越广泛，且用量较大，带来严重的兽药残留问题。近年来，磺胺类药物残留超标现象较严重，主要发生在猪肉、牛肉中。目前，磺胺类残留的检测方法较多，但这些方法对检测仪器要求较高，且价格昂贵，适用范围受到局限[2]。因此，建立一种方便快捷、适用性广、灵敏度高及检出限低的方法很有必要。本文通过基体固相扩散（Matrix Solid-phase Dispersion，MSPD）和固相萃取（Solid-Phase Extraction，SPE）的前处理方法对样品进行净化，用FMOC-Cl衍生，通过高效液相色谱-紫外法（High Performance Liquid Chromatography-ultraviolet Detection，HPLC-UV）同时检测多种脂溶性和水溶性的磺胺类兽药残留。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 材料与试剂

二氯甲烷;三氯甲烷;乙酸乙酯;正己烷;甲醇;无水乙醇;无水醋酸钠;冰醋酸;衍生试剂;硅胶;固定相C18（Celite545）;蜂蜜，包括荆花蜜（野生）、油菜花蜜（野生）、紫云英蜜（汪氏）、万花蜜（汪氏）和荆花蜜（百花牌）。

1.1.2 仪器与设备

液相色谱仪;色谱工作台;检测器（UV，Waters 2487 Dual）;色谱柱（Inersil DDS-3）;氮气吹干装置;可控水浴装置;电子精密天平;101A-1型干燥箱。

1.2 实验方法

1.2.1 溶液配制

（1）标准储备液的配制。称取标准品磺胺吡啶（Sulphapyridine，SP）、磺胺嘧啶（Sulphadiazine，SD）、磺胺二甲嘧啶（Sulphamethazine，SM2）、磺胺甲嘧啶（Sulphamerazine，SDM）、磺胺-6-甲氧嘧啶（Sulphamonomethoxine，SMM）、磺胺-5-甲氧嘧啶（Sulphameter，SME）、磺胺氯哒嗪（Sulphachloropyridazine，SCP）和磺胺甲恶唑（Sulphamethoxazole，SMZ）各10.00 mg溶于10 mL甲醇中，得到l mg/mL的标准样品溶液Ⅰ。量取标准样品溶液Ⅰ 100 μL，定容至10 mL，得到10 μg/mL的标准样品溶液Ⅱ。量取标准样品溶液Ⅱ l mL，定容至5 mL，得到2 μg/mL的标准样品溶液Ⅲ。

（2）FMOC-C1衍生试剂配制。称取157.9 mg FMOC-Cl用3 mL乙腈稀释，得到0.20 mol/L衍生试剂Ⅰ。量取250 μL衍生试剂Ⅰ，定容至1 mL，得到0.05 mol/L衍生试剂Ⅱ。

（3）流动相缓冲液的配制。称取0.820 3 g无水醋酸钠溶于1 000 mL水中，用醋酸溶液调节pH值至4.20。

（4）硼酸缓冲液的配制。称取1.236 3 g硼酸溶于10 mL水中配成0.2 mol/L硼酸溶液，用饱和NaOH溶液调节pH至8.0。

1.2.2 样品预处理

用基体固相扩散法净化样品。称取1.0 g蜂蜜与3.0 g C18混合后加入100 μL标准样品溶液Ⅲ，在研钵中磨匀，晾干，装柱。C18柱用15 mL正己烷淋洗，弃去淋洗液，用10 mL乙酸乙酯洗脱，收集并吹干洗脱液。

1.2.3 衍生化反应

洗脱液吹干后，加入100 μL甲醇和100 μL（pH=8.0）衍生试剂FMOC-Cl（0.05 mol/L），充分振荡，25 ℃条件下反应 420 min。

1.2.4 SPE净化

衍生完毕，用氮气吹干多余的试剂，用1 mL二氯甲烷溶解后充分振荡。取1.0 g硅胶表柱后，依次用10 mL甲醇，10 mL一氯甲烷活化[3]。将振荡后的样品加入活化后的硅胶柱后依次用10 mL 二氯甲烷、10 mL氯仿淋洗;用8 mL含25%甲醇（体积百分含量）的二氯甲烷溶液洗脱，收集并吹干洗脱液，用400 μL流动相溶解，过滤，待上机分析。

1.2.5 仪器条件

紫外检测器的检测波长为263 nm;色谱条件：色谱柱为Inersil ODS 3，选择流动相A为NaOAc-HOAc缓冲体系，pH=4.20;流动相B为乙腈;流速为1.0 mL/min;进样量20 μL;二元梯度洗脱。

2 结果与分析

2.1 多组分分离的色谱条件

根据待测样品的衍生产物结构信息和紫外光谱特征，同时考虑到多种化合物同时检测，选择紫外检测器的检测波长为263 nm[4]。高效液相色譜的二元流动相A为pH=4.20的NaOAc-HOAc缓冲体系，B为乙腈，流动相流速为1.0 mL/min，进样量20 μL。在试验多种流动相比例后，初步确定流动相A（醋酸缓冲液）∶B（乙腈）为45∶55（V/V），在此比例下，分离效果较好。但因实验时间较长，为缩短实验时间采用二元流动相梯度洗脱，对9种磺胺类药物的FMOC-衍生物进行分离，见表1。

图1是标准样品混合溶液经衍生后的液相色谱分离谱图，9种药物在26 min内全部出峰，且分离度良好。但衍生试剂的水解峰（FMOC-OH）较明显，待测样品浓度较低时可能会造成干扰，需要考虑去除。

2.2 基体固相扩散对蜂蜜样品进行净化条件的优化

将样品磨碎后与固定相在物理上混合均匀，使样品中的待分析组分不经过任何提取操作就可以完全地、均匀地结合在固定相的表面，可大大简化分析步骤、缩短分析时间[5]。根据不同组分与固定相的结合力的种类及大小的不同，选用不同的溶剂对固定相进行淋洗，即可将不同的组分逐一洗脱出来。

分别用正己烷、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯和甲醇对样品进行洗脱，发现正己烷能将杂质洗脱但不会将分析物洗脱;二氯甲烷和氯仿能将杂质洗脱并能将部分分析物洗脱;乙酸乙酯可将大部分分析物洗脱且洗脱的杂质较少，甲醇能将分析物和杂质都洗脱下来。淋洗的主要目的是将杂质洗掉，但要保证分析物保留在柱子里，尽量减少分析物的损失。因此，最终选择正己烷作为淋洗液。选择洗脱液的基本条件是将分析物尽可能的洗脱下来，使杂质仍保留在柱中。因此，选择乙酸乙酯作为洗脱液。

2.3 检出限

将磺胺类药品各组分含量为100 μg/L的标准样品稀释为4 μg/L、5 μg/L、6 μg/L、8 μg/L、10 μg/L、25 μg/L和50 μg/L，经衍生反应、SPE净化后进行测定。加标量为4～6 μg/L时，由于杂质峰的干扰，对峰面积的准确积分造成了影响。因此，该方法测定蜂蜜中9种磺胺类药物残留的检出限为4～6 μg/kg。

2.4 加标回收率及精密度试验

选取荆花蜜（野生）作为样本，设置10 μg/kg、25 μg/kg、50 μg/kg、100 μg/kg和250 μg/kg 5个加标量。按照优化后的实验条件，称取1.0 g荆花蜜（野生），分别加入不同量标准样品后经基体固相扩散，衍生化反应，SPE净化后用高效液相色谱-紫外法进行测定。表2、表3结果表明，加标量在50～250 μg/kg时9种磺胺类药物回收率为77.4%～105.1%，相对标准偏差为5.7%～11.5%，试验的回收率和稳定性均较好。加标浓度为10～25 μg/kg时，回收率有不同程度的下降，为63.1%～81.4%，相对标准偏差为7.5%～15.2%。痕量分析回收率大于60%、相对标准偏差小于30%时符合药物残留分析的国际通用标准。

3 结论

本文采用基体固相扩散和固相萃取相结合的技术对蜂蜜中磺胺类残留进行了提取和净化，建立了高效液相色谱-紫外法检测蜂蜜中磺胺类药物残留量的方法。该方法对蜂蜜的加标回收率为63.1%～105.1%，相对标准偏差为5.7%～15.2%，最低检出限为4～6 μg/kg。因此，该方法具有检出限低、回收率高、重复性好、灵敏度高和适用性广等优点，可用于蜂蜜中磺胺类药物残留的分析检测。

参考文献

[1]宋梓豪，石会娟，王鹏，等.蜂蜜中26种磺胺及其增效剂类药物残留检测方法研究[J].农产品质量与安全，2021（1）：60-66.

[2]梁兆斌，李丹，蒲婵娟，等.蜂蜜中13种磺胺类药物残留的同步测定方法的建立[J].黑龙江畜牧兽医，2018（7）：219-222.

[3]容裕棠，张宪臣，张朋杰，等.QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定蜂蜜中21种磺胺类药物残留[J].食品与发酵工业，2018，44（4）：226-233.

[4]高景报，刘二花，田梅，等.饲料中磺胺类药物检测方法研究[J].今日畜牧兽医，2021，37（11）：2.

[5]萨仁高娃.磺胺类药物在饲料和畜产品中的残留危害[J].草食家畜，2021（4）：63-66.

作者简介：李琳（1992—），女，河北栾城人，大专。研究方向：食品药品检测、实验室质量管理。