HPLC-ELSD法测定新霉素氟轻松乳膏中新霉素的含量

2022-04-11王宝艺侯响玲

广州化工 2022年6期

文艺，王宝艺，侯响玲，秦波

(八加一药业股份有限公司，广西桂林 541000)

新霉素氟轻松乳膏为一种白色乳膏剂，在临床医学上适用于各类炎症，现已收载国家药品标准。其最主要组分为硫酸新霉素，原无含量测定，现中国药典已有记载采取微生物检定的方法来测定硫酸新霉素的含量[1]，为加强药品质量控制，阅览相关文献[2-5]，本文设立了HPLC - ELSD法测定新霉素氟轻松乳膏中新霉素的含量，HPLC-ELSD法具有高效能与高速度、高灵敏度、高专属性、高精密度、高准确度，能够有效保证药品制剂质量，为其质量标准中无含量测定添加了依据。

1 仪器与试药

Waters2695高效液相色谱仪(Waters Empower色谱工作站)，美国沃特世公司；ELSD2000ES蒸发光散射检测器，美国奥泰公司；XS205DU电子分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司。

新霉素氟轻松乳膏(批号分别为200705，190806和180302)，市售某药厂；新霉素标准品(浓度为645 U/mg，批号为130309-201512)，中国药品生物制品检定研究院；乙腈为(色谱纯)，德国merk公司；水为超纯水；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Agilent ZORBAX SB C18(250 mm×4.6 mm， 5 μm)，流动相A为乙腈，流动相B为0.1 mol·L-1三氟乙酸分析纯溶液，采用梯度洗脱，0～5 min为20%A，6～14 min为40%A；蒸发光散射检测器加热管的温度为105 ℃，载气流速为2.6 L·min-1，色谱柱温度为25 ℃，流速0.8 mL·min-1，进样量为20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液

取用新霉素标准品适量，精密称定，置于25 mL容量瓶中，用水约10 mL使新霉素溶解后，再加水定容至刻度，摇匀，得每毫升含0.1436 mg新霉素对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液

取样品适量，精密称定(约相当于新霉素7 mg)，置于 50 mL容量瓶中，用水约25 mL溶解本品，微微振摇后置于 80 ℃恒温水浴锅里加热6 min，边加热边振摇匀，待新霉素溶解后，置于超声仪常温超声5 min，取出后将其放冷至室温，最后加水稀释至刻度，摇匀，过滤，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液

按照制配处方工艺制备加入除新霉素外的其他药用辅料，配制成阴性样品，照“2.2.2”项下样品处理方法平行处理新霉素氟轻松乳膏阴性样品，得阴性样品溶液。

2.3 专属性考察

取上述的对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各 20 μL，依照“2.1”的色谱条件，分别以进样量20 μL注入液相色谱仪，逐一记录好色谱图，见图1。实验结果表明新霉素不被制剂中的其他组分干预。

图1 HPLC-ELSD色谱图

2.4 线性关系考察

依照“2.2.1”项下方法制备成0.0378 mg·mL-1、0.0756 mg· mL-1、 0.1513 mg·mL-1、 0.3025 mg·mL-1、0.6050 mg·mL-1系列对照品溶液，分别精密吸取各20 μL，注入高效液相色谱仪，以标准品的质量浓度的对数为横坐标，以峰面积的对数为纵坐标绘制标准曲线，得新霉素线性方程Y=0.0453X+5.7696，r=0.9999。结果显示，新霉素质量浓度在0.0378～0.6050 mg·mL-1范围内和峰面积呈现良好线性关系。

2.5 精密度试验

取适量“2.2.1 ”配制的标准品溶液，依照上述色谱条件，进样量20 μL，连接进样6次，新霉素色谱峰面积RSD为0.67%，结果显示精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一批样品(生产批号190806)溶液分别于2 h、4 h、 8 h、12 h、18 h、24 h下各进样20 μL，记录各峰面积，RSD为2.65%，说明新霉素在24 h内稳定性较好。

2.7 重复性试验

取同一批样品(生产批号190806)6份，依照“2.2.2”项下样品处理平行测定6次，得新霉素的含量平均值为2.35 mg·g-1，RSD为0.38%。结果显现重复性良好。

2.8 加样回收率试验

称取新霉素氟轻松乳膏约1 g置于50 mL容量瓶中，分别按标示量的150%、100%、50%加入新霉素对照品，依照供试品制配方法配制溶液，按上述色谱条件，各以20 μL进样，注入液相色谱仪，计算回收率，结果平均回收率为96.6%，RSD为0.48%(n=9)，见表1，结果表明新霉素回收率良好。

表1 回收率试验结果(n=9)

2.9 样品测定

取“1.2”项下3批新霉素氟轻松乳膏样品，按供试品配制方法制备溶液，以上述色谱条件测定其含量，见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 新霉素氟轻松乳膏的提取条件的确立

新霉素极易溶于水，对新霉素的提取，考虑其他组分对新霉素的的影响，曾用100%甲醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇约25 mL溶解样品，待溶解后用三级水稀释至刻度以取供试品，所测新霉素含量极不稳定，待不断摸索，表明用三级水、水浴、超声后能完全提取，因而使用三级水溶解。分别采取时间为2 min、5 min两种超声方式处理，结果表明超声5 min可使主成分完全溶解。

3.2 流动相的选择

实验过程曾采用乙腈-0.1 mol·L-1三氟乙酸、甲醇- 0.1 mol·L-1三氟乙酸比例分别为(20:80)和(10:90)为流动相测定，结果显示对照品峰形较差；后采取乙腈-0.1 mol·L-1三氟乙酸梯度洗脱，结果显现各峰峰形和分离度较好，且出峰时间适宜，因此，将其作为本实验研究的流动相条件。