许 岩罗 珺王 璐*尚宏鑫张赛赛刘友林赵诗文张国锋杨婷婷 陈文博

（1大连市水产技术推广总站，辽宁大连 116023；2大连圣亚旅游控股股份有限公司，辽宁大连 116023）

海豹是对鳍足亚目种海豹科动物的统称，共有13属18种。中国有3种海豹，分别为斑海豹、环斑海豹、髯海豹。其中，斑海豹是中国鳍足类动物中数量最多的一种，也是唯一能在中国海域繁殖的鳍足类动物[1－6]。辽东湾是野生斑海豹重要的栖息地和繁殖区[7－9]。斑海豹全身生有细密的短毛，背部灰黑色并分布有不规则的棕灰色或棕黑色斑点，腹面乳白色，斑点稀少。初生的仔兽体被白色绒毛，哺乳期1个月左右[10－11]，待到哺乳期结束，仔兽脱换胎毛后开始独立生活。斑海豹除繁殖、换毛季节到浮冰或岸边外，大部分时间在水中生活、觅食。斑海豹主要捕食鱼类和头足类动物。20世纪以来，中国野生斑海豹数量下降很快[12－14]。因为环境恶化、过多猎捕、海洋污染等严重影响了斑海豹繁殖栖息环境，斑海豹种群数量减少，其生存受到极大威胁[1，2，5，7，15－17]。 目前，斑海豹种群数量已下降到濒危程度，危及种群的延续能力，实属濒危物种[18－19]。我国于1988年将斑海豹列为国家二级保护野生动物，为了保护野生动物资源，1992年大连市设立斑海豹自然保护区，1997年经国务院批准晋升为国家级大连斑海豹自然保护区。2021年2月，新调整的《国家重点保护野生动物名录》公布斑海豹晋升为国家一级保护野生动物，属于濒危物种。但是，斑海豹保护力度远远不够，如今斑海豹种群数量仅在2 000头左右[20]。除了保护野生动物的生存栖息环境以外，人工饲养也是一种重要的保护手段，但是人工喂养的食物与野生自然环境中的食物存在较大差异，直接影响着人工饲养的野生动物的生长发育和健康。

本文测定了人工饲养条件下斑海豹毛发中元素Cu、Pb、Cd、Cr、As和 Hg 的含量，以期为今后通过微量元素含量评价斑海豹生长发育和健康状况提供科学参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试样品。供试样品为大连圣亚海洋世界人工饲养的8只斑海豹仔兽的毛发（表1）。

表1 斑海豹仔兽样品信息

1.1.2 供试仪器。试验仪器为原子吸收光谱仪（Aanalyst 600，Perkin Elmer）、双道原子荧光分光光度计（AFS－9130，北京吉天仪器有限公司）。

1.1.3 试验试剂。 试验试剂包括 Cu、Pb、Cd、Cr、As、Hg单元素标准溶液（中国计量科学研究院），丙酮（优级纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）、硝酸（优级纯，国药集团化学试剂有限公司）、硝酸（优级纯，德国默克公司）、高氯酸（优级纯，默克股份两合公司）、盐酸（优级纯，国药集团化学试剂有限公司）；30%过氧化氢（优级纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）、氢氧化钠（优级纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）、抗坏血酸（优级纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）、硫脲（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）、硼氢化钾（优级纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；试验用水为超纯水。

1.2 仪器工作条件

Aanalyst 600原子吸收光谱仪测试条件如表2所示。AFS－9130双道原子荧光分光光度计测试条件如表3所示。

表2 Aanalyst 600原子吸收光谱仪测试条件

表3 AFS-9130双道原子荧光分光光度计测试条件

1.3 样品处理

1.3.1 样品清洗。将斑海豹毛发样品置于烧杯中，加入丙酮，将样品全部浸没，浸泡60 min；弃去浸泡液，用超纯水反复超声冲洗样品3次，将洗后样品置于80℃烘箱中烘干。

1.3.2 样品消解。将烘干后的样品剪碎，称取0.1～0.3 g（精确 0.000 1 g）置于消化管中，加入硝酸 3 mL、高氯酸1 mL，室温静置过夜。将静置过夜后的样品置于电热消解仪中消解，消解至溶液澄清，赶酸，取出后定容至 50 mL，混匀，待测元素 Cu、Pb、Cd、Cr。

将烘干后的样品剪碎，并称取 0.1～0.3 g（精确0.000 1 g）置于消化管中，加入硝酸 5 mL，室温静置过夜。将静置过夜后的样品加入30%过氧化氢7 mL，并将样品置于高压罐中放于高温烘箱中160℃消解4 h，取出消解后样品赶酸，之后定容至50 mL，混匀，待测元素As。

将烘干后的样品剪碎，并称取 0.1～0.3 g（精确0.000 1 g）置于消化管中，同时加入王水8 mL（盐酸∶硝酸=3∶1），室温静置过夜。将静置过夜后的样品置于100℃恒温水浴中，消化1 h至溶液澄清，取出后定容至50 mL，混匀，待测Hg。

2 结果与分析

2.1 斑海豹毛发中不同元素含量及回收率

由表4可知，斑海豹毛发中元素Cu含量最高，平均为 2.85 mg/kg；Cd 含量最低，平均为 0.044 mg/kg。

表4 斑海豹仔兽毛发中不同元素含量测定结果

由表5可知，在加标回收试验中，元素Hg回收率略低，为78%；另外5种测试元素的回收率范围为90%～105%，且6种测试元素回收率的相对标准偏差均小于5%。说明本文所采用的分析方法还是比较令人满意的。

表5 不同测试元素的回收率及相对标准偏差 单位：%

2.2 不同性别及体型斑海豹毛发中微量元素含量差异

利用方差分析和Pearson相关性分析，判断不同性别及体型的斑海豹毛发中微量元素含量是否存在差异性及相关性，结果如表6和表7所示。

表6 斑海豹毛发中微量元素含量方差分析

表7 斑海豹毛发中微量元素含量Pearson相关性分析

由表6可知，不同体长的斑海豹，其毛发中元素Pb 含量差异极显著（P＜0.01），而不同性别、体质量的斑海豹，其毛发中各微量元素含量差异未达到显著水平（P＞0.05）。

由表7可知，斑海豹毛发中元素Cu含量与其体质量成极显著负相关（P＜0.01），元素 Pb、Cd、Cr含量均与其体长成极显著正相关（P＜0.01），且元素 Pb、Cd、Cr含量之间也成显著或极显著正相关。

3 结论与讨论

本文测定了人工饲养条件下斑海豹毛发中元素Cu、Pb、Cd、Cr、As和 Hg 的含量，以期为今后通过微量元素含量科学评价斑海豹生长发育和健康状况提供参考。

结果表明，斑海豹毛发中元素 Cu、Pb、Cd、Cr、As和Hg含量测定结果值的数量级相同或相近，其中元素Pb、Cr含量较为相近。在加标回收试验中，元素Hg回收率略低，为78%；另外5种测试元素的回收率范围为90%～105%，且6种测试元素回收率的相对标准偏差均小于5%。说明本文所采用的分析方法还是比较令人满意的。利用方差分析和Pearson相关性分析得知，不同体长的斑海豹，其毛发中元素Pb含量差异极显著（P＜0.01）；而不同性别、体质量的斑海豹，其毛发中各微量元素含量间差异未达到显著水平（P＞0.05）。斑海豹毛发中元素Cu含量与其体质量成极显著负相关（P＜0.01），元素 Pb、Cd、Cr含量均与其体长成极显著正相关（P＜0.01），且元素 Pb、Cd、Cr含量之间也成显著或极显著正相关。

斑海豹毛发微量元素含量测定结果与人类毛发类似，可能在微量元素方面，斑海豹与人类有着相近的代谢水平。一些人类微量元素研究成果也可能同样适于斑海豹。斑海豹数量稀少，标本数量较少，可以用来进行对比分析的研究缺少，后续仍需要进行更深入、更细致的研究，确定各元素含量参考值及其对斑海豹的具体生理作用，以便从微量元素的角度更加深入地研究斑海豹生长发育和健康状况。这将对斑海豹保护有着非常重要的意义。