王领 刘佳伟 赵诗艺 谷志卓 张守文

关键词 海参多肽;抗衰老;功效评价;化妆品

海参多肽具有延缓衰老、提高免疫力等生理功效。选取30名有效受试者为研究对象，采用无创性仪器、图像分析、受试者主观评价等方式，在第0天、第14天、第28天对眼部皱纹分值、纹理分值、皮肤粗糙度、面部角质层含水量、皮肤弹性进行检测，结合受试者主观评价，利用SPSS数据统计软件对实验结果进行分析。结果显示，含有海参多肽的精华液能减少眼部皱纹分值、改善粗糙度、提高皮肤角质层含水量、增强皮肤弹性，说明其具有良好的延缓衰老及保湿功效，可为海参多肽在化妆品中的应用提供理论依据和数据支撑。

随着物质文化生活水平的提高，人们日益关注自己的皮肤健康。皮肤老化是随着年龄的增长不可避免会出现的现象，衰老是生物个体在生命周期中必然发生的、难以逆转的退行性变化[1]，影响皮肤衰老的主要因素包括外源性因素（光老化）和内源性理论，外源性衰老因素主要是光老化、环境污染等;内源性衰老理论主要包括遗传理论、自由基理论、端粒理论和线粒体理论等[2-4]。皮肤衰老外在表现为皮肤干燥、松弛、粗糙、弹性下降、出现细纹和深纹等[5-6]。

生物多肽具有安全稳定、分子量小、易水溶、易吸收等优点，也有抗氧化、清除过剩自由基、抗衰老等生物活性，不仅能够促进皮肤细胞的增殖，还可为皮肤提供营养，延缓皮肤老化，促进皮肤创伤修复[7]。近年来，多肽在抗衰老化妆品中的应用越来越广泛[8]。

海参为棘皮动物门海参纲动物，含有海参多糖、海参皂苷、脂肪酸、海参多肽等多种生物活性物质[9]。研究表明，海参多肽能清除过剩的DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基，对DNA、蛋白质、脂肪等大分子物质，对细胞或组织的氧化损伤有保护作用[10]。柴玉超等[11]研究了海参肽对人成纤维细胞的影响，并与常用的化妆品抗皱剂进行了对比，发现海参肽能促进人成纤维细胞NIH/3T3的生长，表明其可作为主要功效原料添加到延缓衰老护肤品中。付学军等[12]研究发现，分子量不同的海参多肽表现出不同的抗氧化性。

本研究所用的海参多肽冻干粉由烟台新生代生物科技有限公司提供，该多肽为木瓜蛋白酶水解新鲜海参，离心取上清液，超滤，纯化、浓缩，冻干后得到小分子量海参多肽。多肽中含有酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、组氨酸等氨基酸，90%以上的分子质量低于2000Da。拟通过无创性仪器测定法检测受试者涂抹含海参多肽的化妆品前后眼部皱纹、纹理、粗糙度、角质层含水量和皮肤弹性等指标的变化，验证其延缓衰老和补水保湿等功效，以期为其在化妆品中的应用提供理论依据和数据支撑。

材料与方法

01材料与仪器

测试产品为含有海参多肽的精华液，实验室自制，详见表1。

VISIA面部影像分析系统（Canfield公司，美国），皮肤水分测试仪Corneometer（CM825，德国CK公司），皮肤弹性测试探头Cutometer（MPA580，德國CK公司），皮肤显微镜及活性皮肤表面分析系统VisioScan（VC20plus，德国CK公司）。

02精华液配方组成与制备工艺

该精华液制备方法：将A相中卡波姆在水中预分散，分散溶胀均匀后再加入A相中其他原料，将烧杯放置在75～80℃的水浴锅中，用电动搅拌器匀速搅拌30min左右，直至A相组分全部溶解;将烧杯从水浴锅中取出，冷却至65℃时加入B相组分对羟基苯乙酮，搅拌均匀，冷却至40～45℃时加入CH10（辛酰羟肟酸、1，2-己二醇、1，3-丁二醇），搅拌均匀;待温度降至35℃，依次加入C相原料，慢速搅拌均匀，得到精华液。

03方法

3.1受试者筛选

受试者筛选工作参考2015版《化妆品安全技术规范》。根据《赫尔辛基宣言》，受试者的选择遵循人体测试的医学和伦理学标准，所有受试者的测试都必须出于受试者本人自愿，并在测试前签署知情同意书。

选取健康女性受试者30名，年龄为30～50岁。受试者遴选标准符合《化妆品接触性皮炎诊断标准及处理原则》纳入、排除标准。

3.2产品使用及测试安排

（1）受试者每天早晚各使用一次，取0.5mL（2泵量），以指腹轻柔涂抹肌肤，轻轻按压眼部皮肤直至精华完全吸收即可，连续使用28天。

（2）受试者在第0天、第14天、第28天各随访1次，共3次，要求受试者每次随访为日间同一时间。每次测试前，受试者需用清水清洗面部，使用不含荧光剂的纸巾擦干面部水分，在恒温恒湿环境（温度为21.0±1.0℃，相对湿度为50%±10%RH）静坐30min之后，由技术人员进行皮肤指标的测定。

（3）仪器测试方法和评价指标：使用VISIA面部影像分析系统拍摄受试者左侧面、正面、右侧面图像，记录眼部皱纹分值和纹理分值;使用VisioScanVC20plus测量眼角纹理粗糙度，测量3次取平均值;使用CorneometerCM825测量受试者左右眼尾部位角质层含水量，记录角质层水分含量值，测量3次取平均值;使用CutometerMPA580测量受试者左右眼尾部位的皮肤弹性，记录皮肤总弹性R2值、回弹与拉伸的弹塑性总面积之比Q1值。

（4）受试者主观评估：30名受试者分别在第0天、第14天、第28天随访时完成自我评估问卷调查，根据个人主观感受对测试精华液进行功效评价。

3.3数据分析

应用SPSS20.0统计软件对数据进行处理和统计分析。所有指标数据，进行配对T检验，比较第0天、第14天、第28天时的值，分析使用产品前后皮肤参数是否具有显著性差异，显著性标注方法：“n.s”表示无统计学差异，P>0.05;“*”表示有显著性差异，0.01≤P<0.05;“**”表示显著性差异明显，0.001≤P<0.01，“***”表示有极显著差异，P<0.001。

结果与讨论

01人体功效评价实验结果

1.1眼部皮肤皱纹和纹理分值测试结果

皮肤纹理是皮肤表面微小的、呈多角形的皮丘皮沟，它使皮肤富有弹性并使皮脂腺、汗腺中的分泌物能沿其纹路扩展到整个皮肤表面，随年龄增加而逐渐加深。皱纹是衰老或过度暴露于阳光等外界因素作用下，后天形成的皮肤老化重要标志之一[13]。皱纹和纹理度是反映肌肤年轻的重要指标，其数值的变化趋势能反映一款延缓衰老产品的实际功效和性能，皱纹分值和纹理分值越小，皱纹和纹理改善效果越好。

测试结果如图1所示，从图中可以看出，使用海参多肽精华液后，眼部皮肤皱纹分值呈现下降趋势。与初始值相比，使用测试精华液28天后，皱纹分值由11.79下降为9.69，下降率为17.77%，有显著性差异（P<0.05）。图2为一名受试者使用前后对比图，从中可以看出，受试者在使用含有海参多肽的精华液28天后，眼部皱纹具有明显的减少或淡化的效果。详见表2和表3。

眼部皮肤纹理分值的变化趋势如图3所示，与第0天相比，使用海参多肽精华液后第14天与第28天纹理分值均呈现下降趋势。与初始值0天相比，使用测试产品14天后，纹理分值由8.95下降为8.34，下降率为6.82%，有显著性差异（P<0.05）;使用测试产品28天后，纹理分值下降为8.46，下降率为5.04%，有显著性差异（P<0.05），详见表2和表3。

1.2眼部皮肤粗糙度测试结果

眼部皮肤粗糙度指标是评价延缓皮肤衰老产品功效的一个重要参数，测量值越小则皮肤越平滑。测试周期内，眼部皮肤粗糙度呈现下降趋势，如图2所示。使用测试产品14天后，粗糙度分值由8.27下降为6.30，下降率为23.82%，有显著性差异（P<0.05）;使用测试产品28天后，粗糙度分值下降为5.60，下降率为32.30%，有极显著差异（P<0.001）。图5为一名受试者使用海参多肽精华液28天后的对比图，从图5中可以看出，28天后皮肤变得平滑，表面粗糙度得到明显改善，详见表2和表3。

1.3眼部皮肤角质层含水量测试结果

皮肤屏障功能是衡量皮肤保水能力强弱的重要指标。皮肤衰老时，表皮角质层变薄，皮肤中天然保湿因子含量减少，水合能力下降，细胞皱缩，出现组织学结构和形态改变而使皮肤逐渐出现细小皱纹[14]。角质层水分含量可以间接反映皮肤衰老程度以及抗衰老化妆品的功效，测量值越大，表明角质层水分含量越高，皮肤屏障功能越强。实验结果如图6所示，测试周期内，皮肤角质层含水量呈逐渐上升趋势。与初始值相比，使用产品28天后，角质层含水量数值由50.65升高至60.21，改善率为18.87%，显著性差异明显（0.01≤P<0.05），详见表2和表3。

1.4眼部皮肤弹性测试结果

随着年龄的增加，皮肤中可溶性胶原纤维减少，不溶性胶原纤维增加，皮肤的伸展度随之减少，弹性呈现下降趋势[15]，导致皮肤松弛和皱纹的产生。实验结果如图7所示，测试期间，皮肤弹性R2值和Q1值呈现上升的趋势，皮肤弹性R2值与初始值相比，使用产品28天后改善率为13.08%，有极显著差异（P<0.001）。皮肤弹性Q1值与初始值相比，使用产品28天后改善率为10.64%，显著性差异明显（0.01≤P<0.05），详见表2和表3。

02受试者主观评价

受试者自我评估是让30名受试者在第14天和第28天随访时完成自我评价问卷，根据其个人主观感受对测试产品进行功效评价。如表4所示，使用测试样品28天后，受试者对肌肤弹性的改善程度认为有效的占比100%;对肌肤紧致的改善程度、光滑感的改善程度认为有效的占比97%;对肌肤细纹改善程度、水润改善程度、面部气色改善程度认为有效的占比93%;对肌肤光泽感改善程度认为有效的占比90%;受试者对皮肤整体满意程度及产品整体满意程度分别占比93%和100%。由此可见，该款含有海參多肽的测试精华液在多方面皮肤改善程度上能够达到所有受试者的认可。

结论

经过人体功效评价研究，使用含海参多肽精华液后，受试者眼部皮肤皱纹、纹理度、皮肤粗糙度、角质层含水量和皮肤弹性等方面均有不同程度的改善效果，测试数据与可视化图像及受试者对产品功效的主观评价结果一致，这表明海参多肽具有良好的紧致肌肤、淡化皱纹、保湿等美容功效。

经查询，海参多肽尚未纳入我国《已使用化妆品原料目录》（2021版）中，未来可作为化妆品新原料进行备案。待备案通过后，作为一种延缓衰老活性成分，在化妆品行业应用前景广阔。