李 帆，薛 畅，张金华，任仙樱，喻明军，吴志刚，姜程曦

温郁金中茉莉酸氨基酸合酶关键基因的克隆及生物信息学分析

李 帆1，薛 畅2#，张金华3，任仙樱4，喻明军5，吴志刚2*，姜程曦1*

1. 温州大学生命科学研究院，浙江 325035 2. 温州医科大学药学院，浙江 温州 325035 3. 大理药业股份有限公司，云南 大理 671000 4. 温州莪金医药有限公司，浙江 乐清 325600 5. 安徽环球基因科技有限公司，安徽 滁州 239004

克隆温郁金茉莉酸氨基酸合酶关键基因（JA-amino acid synthetase）的全长cDNA序列，并进行生物信息学和表达分析。根据温郁金转录组数据设计特异性引物。以温郁金根茎的cDNA为模板，通过RT-PCR扩增获得全长cDNA序列，利用生物信息学软件预测基因编码蛋白的特征；利用ClustalW和MEGA 6.06软件构建温郁金的系统进化树；构建原核表达载体PET-22B(+)-JAR，纯化重组蛋白JAR5，并进行鉴定。扩增后的基因编码582个氨基酸，全长1749 bp，且具有典型的GH3特征结构域，不具跨膜域，不存在信号肽，属于不稳定蛋白；PCR扩增后得到约1 800 bp大小的片段，经凝胶过滤色谱纯化，最终得到基于蛋白印迹实验（Western blotting）验证正确的66 200大小的重组蛋白。首次克隆并分析了温郁金基因，纯化了JAR5蛋白，为进一步研究温郁金基因蛋白功能研究提供依据。

温郁金；基因；基因克隆；JAR5；蛋白纯化

温郁金Y. H. Chen & C. Ling系姜科姜黄属药用植物，其根茎、块根均可供药用，为《中国药典》2020年版收载品种[1]，是浙江省著名道地药材，属“浙八味”之一[2]。现代药理与临床研究表明温郁金主要有效成分为萜类和姜黄素类[3-5]，具有抗肿瘤、抗血栓、保肝、抗过敏等多种药理活性[6-7]。

JA-amino Acid Synthetase（）为编码茉莉酸氨基酸合酶的重要基因，是植物响应茉莉酸途径的重要基因[8]。……