张学勇，简莹娜，许发芳，王朝风，朵红

(1.青海大学畜牧兽医科学院，西宁 810016；2.青海省互助八眉猪原种育繁场，海东 810500；3.互助县动物疫病预防控制中心，海东 810500)

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)感染引起的传染性疾病，各年龄段的猪均可被感染，主要威胁仔猪，引起仔猪的急性水样腹泻、脱水和呕吐，对仔猪具有高致死性[1]。成年猪感染PEDV后，临床症状仅表现为厌食呕吐，无上述的明显腹泻症状，所以当母猪感染时，属于带毒隐性感染，但新生仔猪由于母源抗体不足，且免疫系统发育不完善等，使其易感PEDV，感染后仔猪死亡率可高达80%[2]。病猪和隐性感染的带毒猪为主要传染源，一般通过接触和空气传播，健康猪经呼吸道或消化道感染后发病[3]。特别是2010年后，我国猪场报道的PEDV发生变异，猪群中发生突破感染，PEDV在猪场中广泛流行，养猪业面临新的巨大挑战[4]。本文对临床上遇到的一例疑似流行性腹泻仔猪病例进行诊断以及对其防控进行了综述，旨在提高广大养殖场(户)对猪流行性腹泻的防控意识。

1 发病情况

青海某规模化养猪场，其中一栋猪舍于2020年12月初，出生10天的4头仔猪首先发病，出现腹泻呕吐症状，不采食，精神差，发病1～2天后有的呈现水样腹泻，仔猪脱水严重，直至死亡。随后，同猪舍有仔猪陆续发病，母猪无其他症状。

2 剖解变化

仔猪皮肤苍白无光泽，消瘦，肌肉苍白，脱水严重，胃肠道中存有黄白水样内容物，夹杂未消化的乳块，有腥味，肠系膜充血，肠系膜淋巴结肿大，肠粘膜充血。

3 细菌培养

取肝脏、脾脏、肾脏、肠内容物接种血斜面和平板，37℃温箱进行细菌培养。

4 诊断

取肠内容物进行分子生物学检查，用天根粪便基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，具体的操作步骤参考试剂盒说明书，基因组DNA于-20℃中保存备用。同时，按照病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒中提供的操作手册，提取粪样中总RNA，再利用反转录试剂盒反转录合成cDNA。对腹泻相关主要病原进行PCR鉴定(表1)，以提取的基因组DNA，病毒DNA/cDNA为模板，采用特异性引物进行PCR扩增鉴定。

表1 PCR分子生物学鉴定所用引物

5 结果

37℃温箱培养过夜后，挑取有溶血、光滑的菌落，挑一半提DNA进行分子鉴定，另一半继续扩大培养。经过PCR扩增，测序分析未发现致病型大肠杆菌、沙门氏菌等细菌。

经过PCR扩增，结果表明：PEDV的PCR检测为阳性(图1)，猪传染性胃肠炎病毒、猪Delta冠状病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒均为阴性。测序分析发现，本研究鉴定获得的序列与GenBank上传的PEDV变异株同源性为 97.5%～99.5%，与 PEDV 经典毒株 CV777 同源性仅为 95.4%，表明该猪场流行的PEDV为变异株。

图1 PCR鉴定结果

6 防治

根据发病仔猪的临床症状、剖解变化以及实验室诊断，确诊此猪场仔猪感染猪流行性腹泻病毒。确诊后通知猪场采取紧急措施，首先对发病猪舍中的发病仔猪、母猪与其他健康猪群进行隔离。其次，对猪场中所有仔猪进行免疫接种，选择猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗(华毒株+CV777株)，同时对需要补免的母猪亦进行免疫接种[5,6]。再次，对发病猪舍周围环境进行彻底消毒，对其舍墙、栅栏、食槽和垫料等进行清扫消毒。最后，将发病仔猪转移到舍温高于25℃的隔离房中，水槽中添加适量的葡萄糖液、淡盐水、电解多维等营养添加剂，及时对其产生的粪尿等污物进行清除消毒，防止污染其他猪群与环境；同时对发病猪舍的饲养员兽医等也进行一定的隔离消毒，不到其他健康猪舍[7]。为避免细菌等病原的继发感染，在仔猪奶粉中添加适量的抗生素，进行药物预防[8]。12月20日回访，采取紧急处理措施后，12月中旬开始仔猪腹泻减弱，死亡率降低，其他猪群未发生大规模腹泻症状，12月末再次回访，未再发生腹泻呕吐等临床症状，断奶仔猪不再死亡。

7 预防措施

青海大部分地区海拔都在2000米以上，属于高原大陆性气候，冬季受西伯利亚季风和寒流影响，十二月份昼夜气温温差达到16℃(均温2℃～14℃)，昼夜温差较大，这对新生仔猪影响就较大。因为冬季猪场为了保温，忽视了通风作用，研究显示属于冠状病毒的PEDV不仅可以通过粪便—口途径(消化道)传播，还可以经鼻腔(呼吸道)入侵引起仔猪肠道致病[6]，所以通风十分必要，但是要加强管理，注意通风时间与频率，避免发生温度过低引起应激，当猪舍温度低于于20 ℃时，新生仔猪也非常容易发生腹泻。条件允许的猪场可以加装地暖、保温灯等保温设施，温度控制在24～28 ℃(夜间最好开启保温灯)[9]。加强综合管理，特别是饲养管理工作，饲养操作的专业性强，同时兼具责任心，面对疫病的预防，要有像预防新冠病毒一样的措施和责任心，如各个圈舍的门口，主要道路经常性铺撒生石灰，可设置消毒池，对兽医饲养人员以及饲用工具也要进行必要的隔离消毒[10]。仔猪腹泻是猪场冬季易发疾病中的顽疾，只有在预防上下大功夫，才能降低甚至避免疫病发生而减少损失，增加收益。