卢 婷，姚 斌

(贵州省黔东南州食品药品检验检测中心，贵州 凯里 556011)

绿豆衣是在泡发绿豆后揉搓下来的种皮晒干后得到的一种物品，为豆科菜豆属植物绿豆Phaseolus radiatus L.的种子皮(即绿豆皮)，富含膳食纤维、黄酮类物质(主要是牡荆素[1]、异牡荆素[2])等具有生物活性的化学成分，在体内具有重要的生理作用，是维持人体健康不可缺少的营养素[3]。有报道证实绿豆的食疗保健功效主要来自其种子皮[4]。本次实验采用薄层色谱法对绿豆衣中牡荆素、异牡荆素进行定性研究，以期为黔产绿豆衣的质量标准建立提供参考依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

AL104电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；DFY-500高速中药粉碎机(温岭市林大机械有限公司)；卡玛LINOMATAT5 半自动点样器。

1.2 材料

薄层板：浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂出品聚酰胺薄膜(批号：160726)；青岛胜海精细硅胶化工有限公司硅胶G板(批号：130525)；天津思利达科技有限公司硅胶GF254(批号：130515)；上海国药集团化学试剂有限公司聚酰胺薄膜(批号：20170417)。

试剂：正丁醇(分析纯)；乙酸(分析纯)；氯仿(分析纯)；氨试液(分析纯)；甲醇(分析纯)；纯化水。

对照品：牡荆素(批号：101213，含量≥98%，中国食品药品检定研究院)；异牡荆素(批号100304，含量≥98%，江苏永健医药科技有限公司)。

样品：贵州思南县合朋溪镇群河村(编号为样品1、2)，瓮安县天文镇乌江村(编号为样品3、4)，凯里市舟溪镇石青村(编号为样品5、6)三地的绿豆衣样本。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

取药材粉末0.5 g，加入1 mL氨试液湿润，再加入60%甲醇20 mL超声30 min，滤过，滤液挥干，加入2 mL甲醇使残渣溶解，作为供试品溶液。

2.2 对照品溶液的制备

称取牡荆素、异牡荆素对照品适量，分别加60%甲醇溶解，制成浓度为0.1 mg/mL溶液，作为对照品溶液。

2.3 不同展开剂的考察

参照《中国药典》2015年版四部0502薄层色谱法[5]，依次吸取牡荆素对照品、绿豆衣样品1、绿豆衣样品2、异牡荆素对照品各溶液5 μL，点于同一已活化的聚酰胺薄膜板上，根据其主要含牡荆素、异牡荆素拟定以下展开条件：甲苯∶甲醇∶乙酸(15∶5∶1)、醋酸乙酯∶甲酸∶水(8∶1∶1)及正丁醇∶乙酸∶水∶氯仿(6∶2∶2∶1)的上层液为展开剂，展开前，把聚酰胺薄膜板置于展开缸饱和半小时，展开后喷以1%三氯化铝溶液后晾干，置紫外灯光(365 nm)下检视，试验结果显示以正丁醇∶乙酸∶水∶氯仿(6∶2∶2∶1)的上层液为展开剂，所得斑点较为圆整清晰，分离度好。详见图1。

图1 绿豆衣TLC鉴别展开剂考察Fig.1 Investigation of TLC developing solvent formung bean seed-coat

2.4 绿豆衣TLC不同填料板考察

按照《中国药典》2015年版四部0502薄层色谱法[5]，分别吸取牡荆素对照品、绿豆衣样品1、绿豆衣样品2、异牡荆素对照品各溶液5 μL，分别点于已活化硅胶G板(批号：130525)、硅胶GF254(批号：130515)、聚酰胺薄膜(批号：160726)三个不同填料的薄层板上，以正丁醇∶乙酸∶水∶氯仿(6∶2∶2∶1)的上层液为展开剂，同法操作。结果显示聚酰胺薄膜板上效果最佳。结果见图2。

图2 绿豆衣TLC不同填料板考察Fig.2 Investigation of TLC filler plate for mung bean seed-coat

通过对不同展开剂、不同填料薄层板的考察，最终确定以正丁醇∶乙酸∶水∶氯仿(6∶2∶2∶1)的上层液为展开剂，取三个不同产地即：贵州思南县合朋溪镇群河村(编号为样品1、2) 、 瓮安县天文镇乌江村(编号为样品3、4)、 凯里市舟溪镇石青村(编号为样品5、6)的绿豆衣样品在聚酰胺薄膜板上进行以下方法的耐用性考察。点样顺序为：牡荆素对照品、绿豆衣样品1、绿豆衣样品2、绿豆衣样品3、绿豆衣样品4、绿豆衣样品5、绿豆衣样品6、异牡荆素对照品。

2.5 不同温度的考察

进行了低温(5 ℃，10 ℃)、室温(20 ℃)和高温(30 ℃，40 ℃)的考察，结果均较好，详见图3。

图3 绿豆衣TLC不同温度考察Fig.3 Investigation of TLC temperature for mung beanseed-coat

2.6 不同湿度考察

进行了低湿度(30%)、中等湿度(50%)和高湿度(70%)的考察，结果显示，不同湿度下都能较好分离。具体见图4。

图4 绿豆衣TLC不同湿度考察Fig.4 Investigation of TLC humidity for mung bean seed-coat

2.7 不同厂家薄层板考察

共试验两个厂家的聚酰胺薄膜板，分别为浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂和上海国药集团化学试剂有限公司，分离效果佳，所得斑点较为圆整清晰。具体见图5。

图5 绿豆衣TLC不同厂家薄层板考察Fig.5 Investigation of TLC thin-layer plate formung bean seed-coat

3 讨论

本次实验通过对不同薄层板及展开剂的比较，发现用硅胶G薄层板、GF254薄层板，以甲苯∶甲醇∶乙酸(15∶5∶1)、醋酸乙酯∶甲酸∶水(8∶1∶1)为展开剂，所得薄层色谱均不甚理想。进一步筛选后，确定以聚酰胺薄膜板，正丁醇∶乙酸∶水∶氯仿(6∶2∶2∶1)的上层液为展开剂，展开后喷以1%三氯化铝溶液后晾干，置紫外灯光(365 nm)下检视，所得斑点圆整清晰，分离度好，可作为绿豆衣薄层色谱试验条件。

本次实验采用薄层色谱法对贵州三个不同产地的绿豆衣进行了试验，通过对温度、湿度、不同厂家薄层板的考察，发现温度、湿度、不同厂家薄层板对分离效果均无影响，方法耐用性佳。本方法适合南方湿度较大的环境，重现性好，方法简便，可作为贵州产绿豆衣质量标准检验依据。