孔金凤

北部战区总医院和平院区儿科，辽宁沈阳 110003

病毒性心肌炎(VMC)是由柯萨奇病毒、埃可病毒或流感病毒等通过肠道或呼吸道感染后，引起心肌炎性反应的儿科心血管系统疾病[1]。病毒感染心肌细胞后，导致心肌局限性或弥漫性的急性或慢性炎症病变，造成心肌直接损伤和继发免疫反应对心肌组织的持续性损伤，虽然大部分患者可经治疗后痊愈，并且无远期后遗症，但约有5%的患者发展为扩张型心肌病，引发心力衰竭甚至死亡[2]。准确诊断及对VMC患儿疾病转归进行准确判断对改善患儿预后尤为关键。正五聚体蛋白-3(PTX-3)是一种急性时相反应蛋白，已被证实与肺炎、病毒性心肌炎及心功能降低密切相关[3-5]。白细胞介素(IL)-35是由Treg细胞分泌的IL-12p35亚基与EB13亚基通过共价键组合形成，已被发现在VMC患者外周血中呈低表达[6]。目前，虽有部分研究表明PTX-3、IL-35与VMC相关，但并未进行深入研究，PTX-3、IL-35的异常表达与VMC患儿其他辅助检查和实验室检查的相关性报道更少。因此，本研究旨在探讨IL-35及PTX-3在VMC患儿血清中的表达水平，并且分析其与心功能、心肌损伤程度的相关性，为临床诊疗提供参考价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院和平院区儿科确诊的VMC患儿80例作为研究对象，设为VMC组，其中男53例，女27例；年龄5～14岁，平均(10.13±2.50)岁。同时选取本院进行体检的健康儿童50例作为对照组，其中男32例，女18例；年龄5～14岁，平均(10.04±2.47)岁，两组性别、年龄比较，差异无统计学意义。VMC参照《儿童心肌炎诊断建议(2018年版)》[7]进行诊断，诊断标准包括：(1)心功能不全或心腔扩大；(2)血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平升高；(3)心电图2个或2个以上主要导联出现R波改变、房室传导阻滞、非房室结及房室折返引起的异位性心动过速及QRS低电压；(4)发病前有呼吸道和消化道感染史；(5)胸闷、胸痛、心悸、乏力等心血管症状。纳入标准：(1)符合VMC临床诊断；(2)年龄在5～16岁；(3)均为首次确诊。排除标准：(1)合并先天性心脏病者；(2)合并1型糖尿病者；(3)临床资料及检验指标不全者；(4)合并血液系统疾病者。本研究经本院医学伦理委员会审批，编号LZ20180024。

1.2方法

1.2.1血清PTX-3及IL-35水平检测 于受试者入院时抽取静脉血4 mL置入促凝管中，室温下静置30 min待自行分离出血清后，一部分送往本院检验科进行进一步试验，另一部分用移液器抽取血清，冻存于-80 ℃冰箱，每半年对所收集标本统一检测1次。采用酶联免疫吸附试验检测受试者血清中PTX-3及IL-35水平，严格参照说明书进行操作，试剂盒购自英国Abcam公司，货号分别为ab219533、ab222555。

1.2.2心肌酶谱检测 采血及血清分离法同步骤1.2.1，采用放射免疫法检测心肌酶谱相关指标水平，包括心肌cTnI、肌酸激酶(CK)、CK-MB、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)。

1.2.3心功能检测 应用CX50型飞利浦超声仪，采用飞利浦S8-3儿童心脏探头对VMC患儿进行心功能检测，包括患儿心输出量(CO)、每搏输出量(SV)、射血分数(EF)，每个指标最少检测5个心动周期，取平均值为最终检测值。

2 结 果

2.1两组血清PTX-3、IL-35水平比较 与对照组比较，VMC组PTX-3水平升高，IL-35水平降低，差异有统计学意义(t=16.043、-21.748，P<0.05)。见图1。

注：A为两组血清PTX-3水平比较；B为两组血清IL-35水平比较。

2.2VMC组患儿心肌酶谱相关指标水平分析 VMC组患儿心肌酶谱中cTnI、CK、CK-MB、α-HBDH、AST及LDH水平分别为(0.46±0.12)U/L、(258.84±65.09)U/L、(28.53±6.45)U/L、(319.32±46.85)U/L、(54.19±12.37)U/L、(319.32±46.85)U/L。见图2。

2.3VMC组患儿心功能情况 VMC组患儿CO、SV及EF分别为(4.27±0.46)L/min、(55.14±6.62)V/mL、(45.94±4.34)%。见图3。

注：A为VMC组中cTnI水平；B为VMC组CK水平；C为VMC组CK-MB水平；D为VMC组中α-HBDH水平；E为VMC组中AST水平；F为VMC组中LDH水平。

注：A为VMC组中CO水平；B为VMC组SV水平；C为VMC组EF水平。

2.4VMC组患儿血清PTX-3、IL-35水平与心肌酶谱的相关性分析 VMC组患儿血清PTX-3水平与心肌酶谱cTnI、CK、CK-MB、α-HBDH、AST、LDH均呈正相关(P<0.05)，而血清IL-35水平与心肌酶谱cTnI、CK、CK-MB、α-HBDH、AST、LDH均呈负相关(P<0.05)。见图4、5，表1。

表1 VMC组患儿血清PTX-3、IL-35和cTnI、CK、CK-MB、α-HBDH、AST、LDH的相关性分析(r)

注：A为PTX-3水平与cTnI的关系；B为PTX-3水平与CK的关系；C为PTX-3水平与CK-MB的关系；D为PTX-3水平与α-HBDH的关系；E为PTX-3水平与AST的关系；F为PTX-3水平与LDH的关系。

2.5VMC组患儿血清PTX-3、IL-35水平与心功能指标的相关性分析 VMC组患儿血清PTX-3水平与CO、SV、EF均呈负相关(P<0.05)；而血清IL-35水平与CO、SV、EF均呈正相关(P<0.05)。见图6、表2。

注：A为IL-35水平与cTnI的关系；B为IL-35水平与CK的关系；C为IL-35水平与CK-MB的关系；D为IL-35水平与α-HBDH的关系；E为IL-35水平与AST的关系；F为IL-35水平与LDH的关系。

注：A为PTX-3水平与CO的关系；B为PTX-3水平与SV的关系；C为PTX-3水平与EF的关系；D为IL-35水平与CO的关系；E为IL-35水平与SV的关系；F为IL-35水平与EF的关系。

表2 VMC组血清PTX-3、IL-35水平与CO、SV、EF 的相关性分析

3 讨 论

VMC患儿病毒感染后，可导致心肌细胞弥漫性损伤，临床多表现为胸闷、乏力、心律失常等症状，心肌细胞损伤程度的不同，临床症状的严重程度亦不相同。VMC在临床中往往不能及时被诊断，一方面由于该病是由呼吸道感染及肠道感染继发而来，易被其他疾病症状掩盖，另一方面目前临床应用中没有特异性极强的血清标志物，而心内膜心肌活检具有侵入性，难以被患儿家属接受[8]。既往评价VMC患儿心功能多采用超声检测，评估心肌损伤严重程度多参考心肌酶谱，需较长的诊疗时间。本研究通过对血清中炎症相关因子PTX-3及IL-35水平进行检测，分析其与VMC患儿心肌损伤及心功能的相关性，既能对VMC患儿心功能进行评估，又能对心肌损伤程度进行评估，对VMC诊疗具有积极意义。

PTX-3大多由白细胞分泌，与C-反应蛋白同为急性期炎症蛋白超家族成员之一，是最新型的炎性反应因子，已有大量研究证实其高表达对心肌损伤及心肌细胞凋亡具有高特异性，有望成为新的心肌损伤标志物[9-10]。IL-35已被证实其可通过抑制IL-17的分泌而发挥抗炎作用[11-12]。刘艳宾等[13]研究证实，IL-35在VMC患者血清中呈低表达，并且随着疾病的改善其水平升高，可能参与了VMC疾病的进展过程。心肌酶谱是临床应用中常用于评价心肌细胞损伤情况的血清学指标，对心肌炎、心肌梗死、心力衰竭及其他原因引起的心肌损伤均有较高的诊断价值[14-16]。超声检测心功能更是整体评价VMC患儿病情严重程度的常用检测手段，可对患儿就诊时心功能或心力衰竭程度做出客观评估[17]。

本研究通过对80例VMC患儿血清中PTX-3及IL-35水平进行检测，结果表明PTX-3在VMC患儿血清中呈高表达，IL-35呈低表达，说明VMC患儿抗炎因子表达降低，促炎因子表达升高。本研究在对VMC患儿心肌酶谱及心功能进行检测后发现，患儿cTnI、CK、CK-MB、α-HBDH、AST、LDH水平均较高，而CO、SV、EF均低于正常水平，说明VMC患儿心肌受到损伤时，同时影响患儿心功能，符合VMC患儿临床表现和血清学检查。本研究Pearson相关分析结果表明，VMC患儿血清中PTX-3水平与cTnI、CK、CK-MB、α-HBDH、AST、LDH均呈正相关，与CO、SV、EF均呈负相关，说明外周血中PTX-3水平越高，患儿心肌损伤程度越重。并且PTX-3水平与心肌酶谱及心功能指标的相关系数r值均在0.60～0.91，说明PTX-3与上述指标呈中、高度相关，具有较好的参考价值。IL-35水平与心肌酶谱指标呈负相关，与心功能上述指标呈正相关，而IL-35本身为抗炎因子，分析其原因认为，IL-35的低表达本身可能是加重VMC患儿心肌损伤的因素之一，另外也可能是由于病毒对心肌细胞的损伤，强烈的炎性反应促使抗炎因子IL-35水平表达降低。在本研究中，IL-35水平与心肌酶谱及心功能相关的参考值r值均在0.367～0.619，其对疾病的参考价值低于PTX-3，这可能是由于VMC发病机制复杂，当处于急性期时，促炎因子大量释放[18-19]，而患儿自身免疫功能较低[20]，干扰因素较多，降低了IL-35对VCM心肌损伤程度及心功能相关性的参考价值。

综上所述，VMC患儿血清中PTX-3水平升高，IL-35水平降低，且均与心肌损伤程度及心功能指标具有一定相关性，PTX-3、IL-37水平检测对诊断VMC具有一定的临床参考价值。