黄景涛，白 莉，李 艳

武汉大学人民医院检验科，湖北武汉，430060

人乳头瘤病毒(HPV)感染是一种常见的生殖道病毒感染，可促进多种肿瘤的发生发展。目前鉴定出超过200种HPV亚型，近一半的亚型可以感染生殖道[1]。根据诱发肿瘤能力的不同，将HPV分为低危型(HPV6、HPV11型等)和高危型(HPV16、HPV18型等)，持续性的高危型HPV感染是宫颈上皮内瘤变、宫颈癌的重要危险因素；而低危型HPV与生殖道外生性湿疣类、扁平湿疣类病变相关。不同的HPV亚型具有不同的致病能力，而HPV亚型的复合感染是导致宫颈病变加重的重要原因[2-3]。因此，HPV不同亚型感染情况对宫颈癌的早期诊断和预防具有重要意义。本研究对湖北省武汉市的7 152例女性的宫颈脱落细胞进行了21种HPV亚型检测，并对检测结果进行分析，旨在为武汉地区女性宫颈癌的流行病学特征研究及防治提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2018年5月至2020年12月于武汉大学人民医院东院就诊的7 152例女性患者的宫颈脱落细胞标本，对其进行HPV基因分型检测。纳入研究的患者年龄14～89岁，平均(37.50±11.3)岁。根据年龄分布，将患者分为5组，分别为14～<20岁组94例，20～<30岁组1 853例，30～<40岁组2 531例，40～<50岁组1 455例及50～89岁组1 219例。本研究经本院医学伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

1.2仪器与试剂 HPV分型检测试剂盒及配套的核酸提取试剂盒(江苏硕世生物科技公司)，可检测HPV高危型17种：HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、26、82型，HPV低危型4种：HPV 6、11、73和81型。全自动核酸提取仪(江苏硕世生物科技公司)；LightCycler480Ⅱ实时荧光定量PCR仪(瑞士罗氏公司)。

1.3方法

1.3.1标本采集 采样前，用棉拭子轻轻擦拭宫颈口过多的分泌物，将宫颈采样刷伸入宫颈口鳞柱上皮交界处，顺时针旋转3～5圈采集宫颈脱落细胞，将其放入取样管内，密闭送检。4 ℃保存，3 d内完成检测。

1.3.2DNA提取和PCR扩增 按照核酸提取试剂盒说明书提取DNA。按照说明书配制好PCR反应混合液(包含dNTP、Taq酶、引物、荧光探针、UNG酶等)18 μL加入到反应管中，分别加入2 μL的已提取的DNA标本，作为阴性对照和阳性对照。扩增条件为：50 ℃ 5 min，UNG酶处理； 95 ℃10 min，预变性；95 ℃ 10 s，58 ℃ 40 s，循环45次；58 ℃检测荧光强度。

1.3.3结果判读 根据厂家说明书判读结果，阴性对照无典型S型扩增曲线；阳性对照呈典型S型曲线且循环阈值(Ct值)≤30.0；内参基因扩增曲线呈典型S型曲线且Ct值≤36.7。此时根据说明书中HPV亚型定性参考值表判读结果，若扩增曲线呈典型的S型曲线且Ct值<参考值，则判断为阳性；若无典型的S型曲线或Ct值≥参考值，则判断为阴性。

1.4统计学处理 采用SPSS21.0软件对数据进行处理和分析，计数资料以例数和百分率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HPV感染的总体情况 7 152例患者中共检出HPV感染者1 332例，阳性率为18.62%。HPV阳性患者中，仅感染低危型HPV(HPV6、HPV11、HPV73和HPV81型)的患者129例，占9.68%；感染高危型HPV的患者1 049例，占78.75%；同时感染高危型HPV和低危型HPV的患者154例，占11.56%。另外，HPV阳性患者中，主要是单一感染(919例)，占68.99%，二重感染279例，占20.95%；三重及三重以上的感染134例，占10.06%，见表1。

表1 武汉地区女性HPV感染的总体情况

2.2不同年龄段HPV感染情况分析 7 152例女性患者中，30～<40岁组HPV阳性例数最多，14～<20岁组的HPV总体阳性率和高危型阳性率最高，不同年龄组间阳性率比较，差异有统计学意义(χ2=69.76，P<0.05)，见表2。HPV总体阳性率和高危型阳性率随年龄增加的变化趋势相同，都呈U型的变化曲线；14～<20岁组HPV阳性率最高，随着年龄增加，HPV阳性率逐渐降低，30～<40岁组阳性率最低，进入围绝经期和绝经后期后HPV阳性率开始升高，见图1。

表2 不同年龄段HPV感染情况分析[ n(%)]

图1 各年龄段 HPV 总体阳性率和高危型阳性率趋势图

2.3不同HPV亚型检出情况分析 HPV总体阳性率排名前五的亚型分别是HPV52、HPV16、HPV58、HPV53、HPV81型。不同年龄组的HPV亚型分布有细微差别，如14～<20岁组最常见的HPV感染是HPV16、HPV6和HPV11型，而其余年龄组最常见的HPV感染均为HPV52、HPV16、HPV58型，见表3。

表3 不同年龄段HPV各亚型阳性率分布[ n(%)]

3 讨 论

宫颈癌是威胁女性健康最常见的肿瘤之一，每年约有50万以上妇女罹患宫颈癌，30万以上妇女因宫颈癌死亡，严重影响全球女性生命健康[1,4]。HPV是一种无包膜的双链环状DNA病毒，直径在45～55 nm。HPV特别是高危型HPV持续感染是诱发宫颈癌的高危因素。在长期感染过程中，HPV整合至宿主DNA后，导致原癌基因E6、E7的高表达，抑癌基因p53和Rb失活，引发组织病变，从而致使宫颈癌的发生[5]。因此，针对HPV的早期筛查和治疗能够有效地降低宫颈癌的发生率。有研究推荐将HPV筛查作为首选的宫颈癌筛查手段，初始筛查年龄为25岁，建议定期筛查HPV以降低罹患宫颈癌的风险[6]。

宫颈癌的发生率呈现地区差异性，在低收入国家和地区的宫颈癌的发生率和死亡率是高收入国家的2～3倍[7]。HPV阳性率也呈现相同的趋势，低收入国家和地区的HPV阳性率远高于高收入国家，非洲地区具有较高的HPV阳性率和宫颈癌的发生率和死亡率[8]。由于我国地域和民族差异性及经济发展差异性，HPV阳性率和分布存在差异，有研究表明我国的HPV阳性率从10.00%到30.00%不等，如上海浦东地区的HPV阳性率为23.43%[9]，北京海淀区的HPV阳性率为22.60%[10]，厦门地区的HPV阳性率为16.47%[11]。江西地区的HPV阳性率为23.68%[12]等。本研究发现武汉地区HPV的阳性率为18.62%，略低于北京、上海和江西地区的HPV阳性率，高于厦门地区的阳性率。AGODI等[13]研究发现，女性在25岁前会出现第1个HPV感染高峰，随后下降；在围绝经期或绝经期出现第2个感染高峰。在本研究中，HPV的第1个感染高峰出现在14～<20岁组，随后阳性率下降，在50～89岁组出现第2个感染高峰。年轻女性HPV阳性率最高，原因可能与性生活频繁有关，但是HPV感染多为一过性感染，会被机体自身免疫力清除，致使HPV阳性率随着年龄增长逐渐降低；50～89岁组存在第2个HPV感染高峰可能是由于激素水平改变和免疫力下降。

在不同地区和不同人种间，HPV亚型感染分布存在差异，欧洲和北美地区最常见的HPV感染是HPV16、HPV18、HPV31和HPV53型，亚洲地区最常见的HPV感染主要是HPV16、HPV52和HPV58型[8]。对于国内HPV亚型阳性率，不同的研究间亦存在差异。苏州地区最常见的是HPV52、HPV81、HPV16型[14]，厦门地区最常见的是HPV52、HPV16、HPV58、HPV53和HPV39型[11]，北京地区最常见的是HPV52、HPV16、HPV58、HPV53和HPV56型[10]。本研究中，笔者发现武汉地区最常见的HPV亚型分别是HPV52、HPV16、HPV58型，与国内报道的HPV常见亚型相符，但在不同组中有些许差异，14～<20岁组由于性生活活跃，HPV6、HPV11型等HPV亚型阳性率较其他年龄组高。

宫颈癌的三级预防可以有效地降低宫颈癌的发生率，其中一级预防为HPV疫苗接种，是最有效的保护手段。最新的一项167万参与的群体水平研究发现，10～30岁女性接种四价HPV疫苗，能够使女性浸润性宫颈癌的发病率下降63%，证实HPV疫苗接种可以降低宫颈癌的发生率[15]。目前我国已有二价(HPV16、HPV18型)、四价(HPV6、HPV11、HPV16、HPV18型)和九价(HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV45、HPV52、HPV58型)疫苗上市，针对不同年龄段女性，早期接种疫苗可以有效降低宫颈癌的发病率。

综上所述，本研究发现武汉地区HPV阳性率不低，主要以单一感染为主，不同年龄组HPV阳性率存在差异，14～<20岁组和50～89岁组阳性率较高；总体阳性率较高的5种亚型从高到低依次为HPV 52、HPV16、HPV58、HPV53和HPV81 型。提高女性HPV筛查意识，定期进行HPV检测，大力引入和推广HPV疫苗，可以有效地降低HPV阳性率，预防宫颈癌的发生。