张燕红， 黄 山， 高诗娟， 李玉琳， 杜 杰△

（1山西医科大学生物化学与分子生物学教研室，山西 太原 030001；2首都医科大学附属北京安贞医院，北京市心肺血管疾病研究所血管生物研究室，北京 100029）

混合谱系激酶3（mixed lineage kinase 3，MLK3）又被称为MAP3K11（mitogen-activated protein kinase kinase kinase 11），是一种分子量为97 kD 的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，属于丝裂原活化蛋白激酶（mito‑gen-activated protein kinase，MAPK）级联途径的重要分子，接收多种来自细胞表面受体的信号传导，包括受体酪氨酸激酶、趋化因子受体和细胞因子受体等，通过磷酸化并活化MAPK 激酶，介导下游MAPK 成员c-Jun 氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）、p38 和细胞外信号调节激酶的活化，参与调节细胞增殖和细胞凋亡等［1-2］。研究证实MLK3 在心血管疾病的发生发展中发挥重要作用，如MLK3基因敲除鼠心功能下降，血压升高［3-4］，MLK3基因缺失促进小鼠血管内膜新生等［5］。鉴于MLK3 广泛表达于心脏、主动脉、肺和肝等多种组织细胞中，为特异性探索心血管疾病发生过程中MLK3 在血管平滑肌细胞中的作用与机制，本研究利用Cre/loxP 重组酶系统，构建了平滑肌细胞特异性MLK3基因敲除小鼠，为后期研究奠定基础。这种基于平滑肌细胞特异性敲除MLK3的小鼠模型目前还未见报道。

材料和方法

1 仪器和试剂

鼠尾裂解液DirectPCR Lysis Reagent 购于Via‑gen Biotech；蛋白酶K 购于TIANGEN；抗MLK3 抗体购于CST；抗肌球蛋白重链11（myosin heavy chain 11，Myh11）抗体购于武汉塞维尔公司。采用Bio-Rad 凝胶成像分析仪采集DNA 图像；采用Leica 激光共聚焦显微镜（TCS 4D）采集免疫荧光图像；采用北京软隆公司的小动物血压监测仪（BP-2010A）测定小鼠血压；采用深圳雷杜公司的全自动生化分析仪（Chemray 800）分析小鼠外周血生化指标。……