刘星佑 陈鑫昊 黄尹霞 李敏 撒亚莲 贺继刚

1云南中医药大学（昆明650000）；2云南省第一人民医院心脏大血管外科（昆明650000）

20 世纪以来，世界范围内随着人口老龄化、缺血性心脏病、糖尿病和肥胖等危险因素的增加，心力衰竭（heart failure，HF）的发病率不断上升［1］。据统计，全球成年人中约有2 600 万心力衰竭患者，尽管已有治疗心力衰竭的一些方法出现，如药物治疗、双心室起搏、左心室辅助装置和全人工心脏，但心脏移植仍是治疗终末期心力衰竭的“黄金标准”，也是提高终末期心力衰竭患者生存率和生活质量的有效途径［2］。而器官排异反应是影响移植器官存活的主要问题。目前研究认为间充质干细胞的旁分泌是间充质干细胞完成其生物功能的重要机制［3-4］。课题组前期已经证明过表达吲哚胺2，3 双加氧酶（indoleaminae 2，3-dioxygenase，IDO）的骨髓间充质细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSC）分泌的外泌体（exosome）即BMSCIDO-exosome 可以有效抑制免疫排斥反应［5-6］并发现BMSCIDO-exosome 中miRNA-540-3p 表达明显增高且差异具有统计学意义，其功能涉及抗免疫排斥反应，可能是抑制免疫排斥反应的关键分子。笔者采用靶基因预测数据库、PCR、Western blot（WB）及双荧光素酶的方法证实miRNA-540-3p对应的靶基因为CD74，进而采用Western blot 的方法对CD74 下游的p-ERK1/2、p-p65、p-AKT 的表达进行检测。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料、试剂定量PCR 仪购自美国Light-Cycle 96；紫外分光光度计购自美国NanoDropND-1000；凝胶成像仪、垂直电泳槽、湿式转膜槽均购自BIO-RAD；CD74 抗体购自abcam ab202844（批号：GR3206250-17 有效期至2022年9月）；CD28 抗体购自abcam ab243228（批号：GR3277276-3 有效期至2022年9月）；CCL4 抗体购自abcam ab25129（批号：GR189200-6 有效期至2021年9月）；p-p65抗体购自abcam ab86299（批号：GR3204852-21 有效期至2022年9月）；p-ERK1/2 赛默飞MA5-15174（批号：BA 06044196 有效期至2022年9月）；……