刘宜仲,黄守民,王瑛琨,张 煜,刘艺庆,杜飞嫦

深圳市宝安区中心血站，广东深圳 518101

乙型肝炎病毒(HBV)简称乙肝病毒，为直径22～42 nm的球状颗粒，属环状双链DNA病毒，主要通过血液传播(输血和血液制品)，是引起病毒性肝炎的主要病原体之一，可引起全身各系统的一系列不适症状，甚至可能发展为肝硬化、肝癌[1]。我国是HBV高流行地区，据中国疾病预防控制中心数据估计我国人群乙型肝炎表面抗原(HBsAg)流行率为5%～6%[2]。目前，血站基本使用2遍酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂检测HBsAg，1遍核酸试剂检测HBV DNA。2019年4月12日中国输血协会颁布团体标准《血液筛查反应性献血者归队指南T/CSBT 002-2019》[3]，其HBV反应性献血者的归队策略只适用于HBV血清学检测单试剂反应性、核酸检测(NAT)无反应性的献血者，HBV DNA或核酸联合检测[HBV DNA、丙型肝炎病毒(HCV) RNA、人类免疫缺陷病毒(HIV) RNA]反应性的献血者会被永久屏蔽，但是在血站实际工作中有很多HBV血清学检测无反应性、HBV DNA或核酸联合检测反应性的献血标本有待开展确认及随访归队试验验证其是否为NAT假反应性。本文对单项NAT反应性标本进行确认，为单项NAT反应性无偿献血人群归队的可能性分析提供数据支持。

1 材料与方法

1.1材料来源 2017年1月至2020年6月无偿献血标本共126 455份；2018年6月至2019年11月单项NAT反应性即HBsAg无反应性、核酸联合检测(HBV DNA/HCV RNA/HIV RNA)反应性标本210份。

1.2仪器与试剂 全自动加样仪(爱康Xantus) 、全自动酶联免疫分析仪(HAMILTON FAME24/20)、全自动核酸检测分析仪(Grifols Panther)、全自动核酸检测分析仪(Grifols Tigris)。ELISA试剂：HBsAg检测试剂盒(万泰、索灵)；HBV血清学4项标志物试剂：乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎E抗原(HBeAg)、乙型肝炎E抗体(HBeAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)检测试剂盒，均为万泰检测试剂。HBsAg确认试验试剂：HBsAg确认试剂盒(珠海丽珠)。NAT试剂：Procleix Ultrio Plus Assay核酸联合检测试剂盒及其核酸鉴别试剂盒，Procleix Ultrio Elite Assay核酸联合检测试剂盒及其核酸鉴别试剂盒。以上试剂盒均经中国食品药品检定研究院检验合格并在有效期内，实验操作均严格执行说明书要求。

1.3方法 对无偿献血标本用ELISA检测HBsAg，核酸使用转录介导扩增技术(TMA)对标本进行HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA 3个项目联合检测，对HBsAg无反应性、单项NAT反应性的部分血液标本进行HBV血清学4项标志物(HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)及核酸鉴别检测；对核酸鉴别无反应性的标本再进行HBsAg确认试验。

1.4统计学处理 采用SPSS20.0进行数据处理及统计分析，计数资料以频数或百分率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HBV筛查结果情况 2017-2020年无偿献血单项NAT平均反应率为0.43%，具体每年无偿献血核酸联合检测反应性标本情况见表1。

表1 每年无偿献血核酸联合检测反应性标本情况[n(%)]

2.2HBV血清学检测及核酸鉴别结果 对538份单项NAT反应性标本中210份标本(2018年6月至2019年11月)进行HBV血清学4项标志物检测，71.90%的标本HBsAb反应性，其中仅HBsAb反应性的标本占5.24%；有92.86%的标本HBcAb反应性。在这210份标本中，有75.24%(158/210)核酸鉴别为无反应性，HBV DNA反应率为24.29%(51/210)，HCV RNA反应率为0.48%(1/210)，见表2。

表2 单项NAT反应性标本的HBV血清学4项标志物检测及核酸鉴别试验结果

2.3HBsAg确认试验结果 核酸鉴别为无反应性的单项NAT反应性标本中，HBsAg确认试验无反应性的比例占99.37%(157/158)。

3 讨 论

本血站ELISA与NAT同时阳性的标本占0.36%，根据《血站技术操作规程(2019版)》[4]献血者管理规定，献血者捐献血液的检测结果中，乙肝、丙肝、艾滋病任意一项中血清学检测和NAT同时呈反应性，则永久性屏蔽，此献血人群不适宜归队，需做好解释工作。而团体标准《血液筛查反应性献血者归队指南T/CSBT002-2019》[3]规定可归队的是单试剂HBsAg反应性、NAT无反应性的献血者，而实际工作中有一部分HBsAg无反应性、NAT反应性的标本，本血站2017-2020年这部分标本比例为0.43%，说明这部分献血者人数不少。本研究的210份单项NAT反应性标本中，核酸鉴别有75.24%为无反应性且HBsAg乙肝确认试验(99.37%)几乎为无反应性，提示核酸联合检测存在假阳性的可能。因此，血站对单项NAT反应性的标本进行归队有现实的研究意义。陈锦艳等[5]认为，无偿献血假反应性会使献血者产生一定的负面心理影响，对这一部分献血者可增加专业的心理干预及开展确诊试验，将两项结果反馈给献血者可减少其心理负担。鉴于单项NAT反应性标本中可能存在的假反应性结果，也应对这部分献血者进行鉴别、确认及归队，可给予献血者更多的解释及安慰，减少其心理困扰，针对单项NAT反应性标本的归队研究体现了血站人文关怀和对献血者权益的保护。

但单项NAT反应性标本中，也存在NAT漏检或者患者可能处于HBV窗口期感染的情况，应谨慎归队。程卫芳等[6]分析28例核酸联合检测或HBV DNA单反应性的献血者归队，两次随访NAT仍出现至少1次反应性者占75.00%，这部分献血者经分析均为HBV隐匿性感染，提示单项NAT反应性标本中能重归献血者队伍者并不多。杨转笑等[7]研究ELISA检测无反应性而NAT反应性的标本，19例无门槛自愿归队模式献血者有3例HBsAg转阳，提示无门槛自愿归队模式献血者存在窗口期感染风险；26例献血10次以上归队模式献血者中88.46%归队成功，提示献血次数更多，归队成功率越高。本研究核酸联合检测无反应性的标本中有92.86%的标本HBcAb反应性，提示大部分核酸联合检测无反应性献血者有或有过感染的风险，因此，为了保障用血安全，应谨慎归队及建立更严谨的归队模式做好归队把关。

单项NAT反应性的献血者中有较高比例(71.90%)出现HBsAb反应性，HBsAb是保护性抗体，有研究认为，献血者的归队评价指标可能需要附加HBsAb(定量)检测[8]。HBsAb单反应性献血者的HBV DNA反应性有可能是由于献血者打了乙肝疫苗后，HBsAb中和HBV的免疫复合物在被免疫细胞吞噬前被检测到[9]。本研究发现，HBV核酸联合检测反应性、HBcAb无反应性、HBsAb反应性的11份标本中，其核酸鉴别HBV DNA反应的标本仅占1份，提示HBV核酸联合检测反应性、HBcAb无反应性、HBsAb反应性的这部分献血者NAT假反应性的可能性较大，其未感染过HBV，同时带有保护性抗体HBsAb，这部分人群值得进行进一步的随访和归队确认。本研究中有1份标本HBsAg、HBeAb无反应性,HBsAb、HBeAg、HBcAb反应性,有研究认为，这种结果可能是高水平HBsAg导致钩状效应，使HBsAg出现假阴性,或可能是HBsAg水平低于检测阈值导致[10]。也有研究报道，乙肝患者在治疗过程中HBsAg水平处于一个波动状态,抗病毒治疗可促进乙肝患者HBsAg转为无反应性[11]。HBsAg无反应性,HBsAb、HBeAg、HBeAb及HBcAb反应性标本在临床检验上非常少见，本研究有1份此类标本，但其核酸鉴别结果为HBV DNA反应性，这可能也是高水平HBsAg导致的血清学假阴性结果，或者是接种了乙肝疫苗产生了抗体。有血液中心把HBcAb纳入血液筛查项目，把HBcAb检测作为献血者归队策略的一项重要的检测方法[12]。日本在献血者筛查中增加了HBsAb和HBcAb检测，对高滴度HBsAb低滴度HBcAb的献血者进行归队，而对低滴度HBsAb高滴度HBcAb的献血者进行屏蔽[13]。对单项NAT反应性无偿献血人群归队的可能性研究中增加HBV血清学4项标志物检测，可有助于更加了解献血者情况，以及给献血者结果回馈解释提供更多的数据。

本文对单项NAT反应性标本进行HBV血清学4项标志物检测及核酸鉴别试验，并对核酸鉴别无反应性的标本进行HBsAg确认试验，分析核酸联合检测存在假反应性的可能性，综合分析单项NAT反应性无偿献血人群归队的可能性，对扩大献血队伍和对献血者结果回馈解释有一定意义。但为保障用血安全，应谨慎归队[14]。从血清学检测、NAT及确认试验结果初步探讨献血者的感染状况，仍在流行病学调查方面存在不足。下一步可对献血者增加流行病学及临床症状调查，进行多次追踪检测，进一步补充完善信息，提供更加全面的数据进行分析；同时可补充HBV检测的其他方法(如化学发光等)及增加献血者献血次数的归队门槛[7]等，以建立更科学严谨的单项NAT反应性献血者归队策略。