曹丙蕾，张 群，刘 敏，王 群，尹伟力

（1.济南海关技术中心，山东 济南 250014；2.青岛海关技术中心，山东 青岛 266114）

猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎是由冠状病毒引起的急性、高传染性腹泻病，它们会导致猪呕吐、水样腹泻和脱水，临床表现较为相似，在发病机制、病理变化及流行病学上难以鉴别诊断[1]。液相芯片技术就是一种新型快速高通量的检测技术，将PCR的多重性和液相芯片检测的快速性有效地结合起来，在疾病检测、病原微生物鉴定、激素水平测定、药物研发、细胞因子检测等各领域得到了快速发展与应用[4-6]。本研究采用液相悬浮芯片技术建立了PEDV和TGEV的二重鉴别诊断技术，快速有效地对2种病原进行鉴别诊断，为临床样本检测提供高效灵敏的检测平台。

1 材料与方法

1.1 毒株

猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）等核酸样本由本实验室保存，PEDV和TGEV等体积病毒液混合制备PEDV和TGEV混合样本。参考磁珠法病毒核酸提取试剂盒说明对病毒样本进行核酸提取。

1.2 试剂与耗材

磁性荧光编码微球（带有anti-TAG标签）、鞘流液（美国Luminex公司生产），TMAC（四甲基氯化铵）、Tris、SDS、链霉亲和素－藻红蛋白（SA-PE）（美国Sigma公司生产），磁珠法病毒RNA提取试剂盒（西安天隆公司生产），一步法RTPCR试剂盒、一步法荧光RT-PCR试剂盒、DL2000 marker等试剂（Ta kara公司生产）。

主要设备包括：Bio-Plex 200悬浮芯片系统（美国Bio-Rad公司生产），核酸提取仪（天根科技公司生产），基因扩增仪（杭州博日公司生产），荧光定量PCR仪（美国Bio-Rad公司生产）等。

1.3 方法

1.3.1 引物的设计与合成……