杨亚丽 ， 田 荣 ， 袁 茵 ， 王艳佳 ， 杨晓玲 △

（1宁夏医科大学基础医学院，2国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室，3宁夏血管损伤与修复研究重点实验室，宁夏银川750004）

同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）是体内甲硫氨酸和蛋氨酸循环的代谢产物，在正常情况下一般维持在较低的水平。目前研究已证实，高同型半胱氨酸血症（hyperhomocysteinemia，HHcy）可以作为多种疾病如心脑血管疾病、肾损伤和脑卒中等的独立危险因素［1］，尤其是冠心病和脑卒中等，其致病机制与促进血管平滑肌细胞增殖、增加血小板聚集、损伤血管内皮和激活免疫反应等有关［2-3］。Ras 相关蛋白1（Ras-related protein 1，Rap1）是小分子 G 蛋白 Ras超家族成员之一，在各种因子刺激下，与细胞膜上的受体结合，对细胞的增殖、迁移和分化等进行调控，已成为疾病防治的新靶标［4］。Pei 等［5］发现，肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）通过触发腺苷酸环化酶激活gp91phox，而该过程涉及Rap1A 激活，提示Rap1A 通过免疫炎症反应参与了疾病的调控。但Rap1A 在Hcy 致巨噬细胞增殖及其在免疫应答中的作用尚不清楚。本研究以ANA-1小鼠巨噬细胞为研究对象，探讨Rap1A 在Hcy 致ANA-1 细胞增殖及M1 极化中的作用，为Hcy 相关疾病的预防和治疗提供理论依据。

材料和方法

1 主要试剂

ANA-1 小鼠巨噬细胞购自中国医学科学院细胞培养中心。Hcy（Sigma）；胎牛血清购自 Gibco；蛋白提取试剂盒和蛋白定量试剂盒（江苏凯基生物技术有限公司）；总RNA 提取试剂盒（天根生化科技有限公司）；逆转录试剂盒和荧光定量PCR 试剂盒（TaKa-Ra）；抗Rap1A 单克隆抗体和抗p27 单克隆抗体（Abcam）；抗增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）单克隆抗体（Affinity）；……