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2-溴棕榈酸缓解脊髓炎性痛的机制研究*

2021-12-29董志斌王煜嘉朱海丽

湖北科技学院学报(医学版) 2021年5期
关键词:模型

董志斌,王煜嘉,李 岱,朱海丽

(湖北科技学院药学院,湖北 咸宁 437100)

脊髓炎性痛是脊髓受损后常见的症状之一,导致脊髓炎的因素很多,包括脊髓损伤、感染及自身免疫性疾病等[1]。在中枢神经系统中,神经元和星形胶质细胞两者是结构和功能伙伴关系,在应对伤害或疾病时共同起作用。生理状态下星形胶质细胞处于静息态;病理性疼痛(包括神经痛、炎性痛和骨癌痛)状态下,脊髓星形胶质细胞被激活,释放促炎因子并维持疼痛[2]。

NLRP3炎症小体在炎症因子的加工和释放中起着关键作用,如白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-18[3]。NLRP3炎症小体由NOD样受体3(NOD-like receptor 3,NLRP3)、接头蛋白凋亡相关点状样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)和效应蛋白半肤氨酸蛋白酶1前体(pro-caspase-1)组成。NLRP3炎症小体介导pro-caspase-1活化为caspase-1,进而导致IL-1β和IL-18的成熟和释放,发挥免疫炎症效应[4]。

2-溴棕桐酸(2-Bromopalmitate,2-BP)可影响蛋白质在膜结构上的定位及功能,是一种常用的蛋白棕桐酰化抑制剂[5]。本研究明确了鞘内给药2-BP对脊髓炎性痛的缓解作用,并探讨其病理机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

本实验中使用的Sprague-Dawley(SD)大鼠购于湖北省实验动物中心,共18只,体质量180~200g,6~8周龄。动物合格证号:No.42000600041944。

1.2 主要试剂

二甲基亚砜(DMSO)、2-BP、蛋白酶抑制剂均购自美国Sigma公司,加强型RIPA lysis buffer、SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒、TNF-α均购自上海碧云天生物技术有限公司。Anti-NLRP3(A12694)、anti-β-actin(A1978)、anti-ASC(A11433)、anti-caspase-1(A0964)、anti-GFAP(A19058)、HRP标记山羊抗兔IgG均购自武汉爱博泰克生物科技有限公司。

1.3 模型建立及分组处理

构建大鼠脊髓炎性痛模型,方法如下[6]:剔除大鼠背部注射部位毛发并进行皮肤表面消毒,用无菌微量注射器于L5和L6脊椎棘突间隙垂直进针,进入蛛网膜下腔,缓慢倾斜45°注入100ng/10μL TNF-α,构建脊髓炎模型大鼠(建模组),分为模型组(n=6)及模型给药组(n=6);……

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