肖素英，陈国伟，庄国宾

（1.珠海市中西医结合医院医学检验科；2.珠海市中西医结合医院男科，广东 珠海 519020）

男性不育是指由男性因素引起的不育，一般将婚后未采取任何避孕措施同居2年以上，但女性未怀孕表现的称为不育症，男性不育症呈现不断上升趋势，分析可能与心理因素、生理疾病、环境因素等有关[1]。通常精液的常规分析是筛查男性不育原因的第一道程序，其中主要包括精子形态学、前向运动精子总数、精子浓度等检查，精子形态学是反映男性生育能力的一个重要指标；前向运动精子总数是反映精子活力的重要指标；精子浓度即精子密度，是精液常规中的一项重要指标，若浓度较低，会导致男性生育能力下降[2]。由于精液常规分析只是从数量与形态方面进行分析，对受精能力与精子功能方面提供的信息较少，故无法对男性生育能力的诊断和预后评估提供准确信息。精子脱氧核糖核酸（DNA）碎片指数（DFI）是一种评估精子质量的指标，能反映精子遗传物质是否完整，可更客观、更全面地评估男性生育能力，是判断男性生育能力的重要指标之一[3]。基于此，本研究旨在探讨男性不育患者精子DFI与精液各参数的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析珠海市中西医结合医院2019年1月至2021年1月收治的110例男性不育患者的临床资料，根据患者年龄的不同将其分为20～25岁组（31例）、 26～30岁组（49例）、31～35岁组（19例）、≥ 36岁组（11例）；根据患者精子浓度进行分组，分为正常组（56例，精子浓度≥ 20×106/mL）和异常组（54例，精子浓度< 20×106/mL）；根据患者精子活力进行分组，分为正常组（41例，前向运动精子率≥ 35%）和异常组（69例，前向运动精子率< 35%）；根据患者精子形态进行分组，分为正常组（63例，正常形态精子率≥ 4%）和异常组（47例，正常形态精子率< 4%）；根据患者的精子DFI进行分组，分为Ⅰ组（37例，DFI ≤ 10%）、Ⅱ组（54例，DFI > 10%且≤ 20%）、Ⅲ组（19例， DFI > 20%）。诊断标准：参照《中西医结合泌尿男科病症诊疗手册》[4]中男性不育的诊断标准。纳入标准：符合上述诊断标准者；临床病例资料完整者；身体状况良好者；无家族遗传性疾病病史者；无性功能障碍者等。排除标准：合并其他恶性肿瘤疾病者；经体格检查男性性征、附睾、睾丸、附属性腺及生殖器明显异常者等。本研究经珠海市中西医结合医院医学伦理委员会批准。

1.2 研究方法 ①精液获取：指导患者在留取精液前禁欲2～7 d，采用手淫法获取新鲜精液，将已获取的精液置于洁净容器中，于37 °C的水浴恒温箱内进行液化。②精液分析：将液化后的精液取10 μL进行涂片，采用彩色精子质量检测系统检验分析精液质量，分别将前向运动精子、精子浓度进行记录，采用瑞 - 吉染色镜对精子形态进行观察。③DFI检测：新鲜精液行常规检查后，使用生理盐水进行稀释，精子密度至（5～10）×106/mL，取待测标本30 μL加入已融化的易溶凝胶管中， 37 ℃孵育5 min待用，充分混匀，取预先处理的玻璃片一张，置于4 ℃冰箱5 min，待玻片冷却后将其取出，立即垂直浸入反应池内，池中盛有反应液A，温度设置20～28 ℃，反应时间为7 min，然后将玻片垂直浸入盛有反应液B的反应池中，温度不变，反应时间为25 min，再将玻片浸入纯化水中，时间为5 min，期间可进行1～2次换水。之后将玻片依次放入70%、90%、100%的乙醇中进行脱水，时间均为2 min，取出自然晾干。晾干后覆盖15 ～ 20滴瑞式染液，缓慢再次加入30 ～ 40滴瑞式染液，并轻轻吹打混合染液，15 min后轻轻冲洗染片，使用光学显微镜于400倍镜下，对400条精子形态进行观察，分别统计大晕环精子、中晕环精子、小晕环精子及无晕环精子个数，同时统计退化精子的个数，DFI =（退化精子＋无晕环精子+小晕环精子）总数/400×100%。

1.3 观察指标 ①比较不同年龄组患者精液参数和精子DFI，精液参数包括正常形态精子率、前向运动精子率、精子浓度。②比较精子各参数正常组与异常组患者精子DFI。③比较不同精子DFI组患者精液各参数。④采用Pearson相关性分析法分析男性不育患者精子DFI与年龄、精液各参数的相关性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件分析数据，计量资料以(±s)表示，两组间比较行t检验，多组间比较，采用重复测量方差分析；精子DFI与年龄、精液各参数的相关性采用Pearson相关性分析法进行分析。以P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同年龄组患者精液参数和精子DFI比较 31～35岁组、≥ 36岁组患者精子DFI均显著高于20～25岁组与26～30岁组患者，差异均有统计学意义（均P< 0.05）；而不同年龄组患者的前向运动精子率、精子浓度、正常形态精子率相比，差异均无统计学意义（均P> 0.05），见表1。

表1 不同年龄组患者精液参数和精子DFI比较(  ±s)

表1 不同年龄组患者精液参数和精子DFI比较(  ±s)

注：与20～25岁组比，*P<0.05；与26～30岁组比，#P<0.05。DNA：脱氧核糖核酸。DFI：DNA碎片指数。

组别 例数 正常形态精子率(%) 前向运动精子率(%) 精子浓度(×106/mL) 精子DFI(%)20～25 岁组 31 3.98±1.79 29.18±11.03 23.31±10.36 12.35±5.03 26～30 岁组 49 3.62±1.13 29.35±11.42 26.54±11.32 12.67±6.21 31～35 岁组 19 3.88±1.03 28.31±10.73 30.13±14.26 16.56±7.45*#≥ 36 岁组 11 3.82±1.82 26.79±11.41 24.15±11.36 16.98±7.31*#F值 0.455 0.180 1.481 3.259 P值 >0.05 >0.05 >0.05 <0.05

2.2 精子各参数正常组与异常组患者精子DFI比较 精子形态异常组与精子活力异常组患者的精子DFI分别显著高于精子形态正常组与精子活力正常组，差异均有统计学意义（均P< 0.05），而精子浓度正常组与异常组精子DFI相比，差异无统计学意义（P> 0.05），见表2。

表2 精子分析下各参数正常组与异常组患者精子 DFI比较 (  ±s , %)

表2 精子分析下各参数正常组与异常组患者精子 DFI比较 (  ±s , %)

组别 精子浓度 精子活力 精子形态例数 精子D F I 例数 精子D F I 例数 精子D F I正常组 5 6 1 4.0 8±6.4 4 4 1 1 2.0 5±5.0 3 6 3 1 4.9 1±5.6 2异常组 5 4 1 3.5 9±5.1 1 6 9 1 8.1 5±7.1 6 4 7 1 7.0 4±5.3 1 t值 0.4 4 1 4.7 9 3 2.0 1 3 P值 >0.0 5 <0.0 5 <0.0 5

2.3 不同精子DFI组患者精液各参数比较 与Ⅰ组比，Ⅱ、Ⅲ组患者正常形态精子率、前向运动精子率均显著降低，且Ⅲ组患者前向运动精子率显著低于Ⅱ组，差异均有统计学意义（均P< 0.05），而各组患者精子浓度相比，差异均无统计学意义（均P> 0.05），见表3。

表3 不同精子DFI组患者精液各参数比较(  ±s)

表3 不同精子DFI组患者精液各参数比较(  ±s)

注：与Ⅰ组比，△P<0.05；与Ⅱ组比，▲P<0.05。

组别 例数 正常形态精子率(%)前向运动精子率(%)精子浓度(×106/mL)Ⅰ组 37 4.44±1.68 35.21±8.59 27.76±12.24Ⅱ组 54 3.68±1.46△ 27.24±10.56△ 25.34±11.26Ⅲ组 19 3.55±1.33△ 19.87±10.03△▲ 26.32±12.31 F值 3.411 16.313 0.464 P值 <0.05 <0.05 >0.05

2.4 相关性分析Pearson相关性分析结果显示，精子DFI与年龄呈正相关，差异有统计学意义（r= 0.296，P< 0.05），精子DFI与正常形态精子率和前向运动精子率呈负相关，差异均有统计学意义（r= -0.287，-0.316，均P<0.05），见表 4。

表4 精子DFI与年龄及精液各参数的相关性分析

3 讨论

男性精子中的DNA是传载人类遗传信息的载体，其中DNA的完整性是将遗传物质正确传给子代的先决条件，若精子染色质结构受到损伤，可导致精子的受精能力、受精卵的分裂与胚胎发育受到影响；同时基因突变、染色体异常与环境因素均可导致精子DNA损伤，从而导致精子核的异常[5]。在多因素的联合作用下，可造成精子DNA损伤，其中导致精子损伤的机制主要包括产生精子过程中的细胞凋亡、氧自由基在精子运输过程中的影响等，同时有学者指出，精子DFI与复发性流产密切相关[6]。

本研究结果中，年龄越大精子DFI水平越高，精子形态和活力异常组患者的精子DFI均显著高于正常组，随着病情的发展，前向运动精子率逐渐升高，而精子浓度在各组内、组间比较，差异均无统计学意义。分析其原因可能在于，伴随年龄的增长，精子的凋亡机制减退，再加上氧化应激反应无法有效清除DNA受损精子，导致DNA受损精子也随之增加，并随着精子的损伤程度增加，精子活力与形态均可受到影响，如精子活力降低与形态异常等，导致正常形态精子率、前向运动精子率降低[7-8]。

本研究结果还显示，精子DFI与年龄呈正相关，精子DFI与正常形态精子率、前向运动精子率呈负相关，而精子DFI与精子浓度无相关性。分析其原因可能为，对于男性来说，其生育能力可随年龄的增加而减退，比如性激素水平、精液质量等均可随年龄的增加而下降；并且，随着其年龄的增长，睾丸等器官会逐步发生老化，以致于精子活力与精子正常形态均随之下降[9]。男性不育患者的精子DFI随着年龄的增大而升高，但年龄的增长并不影响精子形态、前向运动精子率与精子浓度，同时DFI可影响患者的正常形态精子率与前向运动精子率，但精子的浓度与精子DFI并无明显相关性，提示男性不育患者年龄与精子DFI具有一定相关性，同时精子的正常形态率与前向运动精子率可随着精子DNA的损伤程度而降低，与郑慧澜等[10]研究结果基本相符。

综上，男性不育患者精子DFI与其年龄、精子活力、正常精子形态具有一定相关性，可作为常规精液检查的补充，精子DFI能够客观全面评估男性的生育能力，可作为评估男性生育功能的重要指标之一。但本研究存在一定的不足之处，如选取病例数较少，未来可收集多病例数进行深入研究。