宋凌燕，王亚飞，王敏，薄红霞，郭旭霞

(长治医学院附属和平医院，山西 长治 046000)

结核病目前仍是危害人类健康的重大传染病，耐多药结核病(MDR-TB)的出现和流行是目前全球结核病控制的重大挑战。据世界卫生组织(WHO)2018年发布的数据[1]，中国结核病患病率占全球的9%，因此加强结核分枝杆菌耐药性的研究尤其重要。耐药基因检测可以快速、准确获得患者的分子药敏试验结果，有利于早期治疗。目前，利福平和异烟肼作为抗结核的一线药物，具有杀菌力强、不良反应少、价格便宜等优点，本研究通过熔解曲线法分析长治地区结核分枝杆菌对利福平和异烟肼这两种药物的耐药率及耐药基因突变位点，以期给利福平和异烟肼抗结核病的临床应用研究提供客观依据。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2018年2月—2019年8月住院患者结核分枝杆菌涂片阳性的痰液及分离培养的纯结核分枝杆菌株标本363 例，其中男250 例，女113 例，年龄14～89 岁。

1.2 标本收集及结核分枝杆菌脱氧核糖核酸提取

1.2.1 痰液样本

留取患者痰液涂片抗酸染色阳性(2+以上)的痰液标本，以1∶1比例加入4%NaOH，混匀，液化20 min以上，3 000 r/min，离心20 min，弃上清，磷酸盐缓冲液(PBS)重悬沉淀，3 000r/min，离心10min，弃上清，1mL生理盐水重悬沉淀，12000 r/min，离心5 min，弃上清，加入250 μL结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(TBDNA)提取液，99℃加热20min，12000r/min，离心5min，上清液为待测TB DNA样本。

1.2.2 纯结核分枝杆菌菌株

留取改良罗氏培养基上生长的典型结核分枝杆菌，刮取适量的菌落加入到250 μL TB DNA提取液中，99 ℃加热20 min，12 000 r/min，离心5 min，上清液为待测TB DNA样本。

1.3 熔解曲线法

严格按照厦门致善生物科技有限公司结核分枝杆菌利福平、异烟肼耐药突变试剂盒说明书进行样本的检测和结果的判读。……