宋燕红，张 琪，容翠环，林 贞 （.江门市新会区第二人民医院妇女儿童保健科，广东江门 5900；.江门市新会区妇幼保健院儿科，广东江门 5900；3.江门市新会区妇幼保健院儿童保健科，广东江门 5900）

短链/支链酰基辅酶A 脱氢酶缺乏症（SCADD）是一种脂肪酸氧化代谢障碍疾病，主要表现为神经发育障碍[1-2]。在新生儿筛查中，由于异戊酰肉碱的荷电质量和2-甲基丁酰肉碱相同，通过串联质谱筛查SCADD 时，异戊酸血症（IVA）中的C5 酰基肉碱、C5/C3 和C5/C2 比例也会提高，导致假阳性率增加[3]。研究发现，在中国人群中发现的SCADD 病例与短/支链酰基辅酶a 脱氢酶（ACADSB）基因c.1165a>G 突变有关[4]。鉴于此，本研究采用串联质谱技术检测江门地区新生儿SCADD 患病率和c.1165A>G 突变的携带率，判断阳性SCADD 新生儿携带的c.1165A>G 突变是否相同，评估C5酰基肉碱截止值以区分SCADD和IVA。

1 资料和方法

1.1 研究对象

选取2015 年1 月至2020 年6 月江门地区出生且自愿接受串联质谱技术筛查的新生儿81 452例。

1.2 方法

SCADD的确定诊断方法为检测皮肤纤维细胞中脂肪酸的代谢状况。本研究新生儿筛查使用非衍生串联质谱技术，以C5酰基肉碱截止值≥0.44 μmol/L作为SCADD 婴儿的筛查标准。通过在尿液酰基甘氨酸分析中检测到2-甲基丁酰甘氨酸或在定量尿液有机酸分析中检测到2-甲基丁酸升高确定SCADD 诊断[5]。随机抽取1 130 例（未标记C5 酰基肉碱浓度≥0.44 μmol/L）新生儿中的干血样筛查标本进行突变分析，以确定新生儿c.1165 A>G 突变的患病率和携带频率。

1.3 ACADSB c.1165 A>G突变分析

采用DNA 纯化液和DNA 洗脱液（美国Qiagen公司）从干血样筛查标本中提取基因组DNA，然后转移到25μL试管中进行PCR反应。PCR产物位于ACADSBc.1165A>G 位点侧面，大小为260 bp。将10 μL PCR产物与限制性内切酶BtsC I在50 ℃下反应2 h，随后在3%琼脂糖凝胶中电泳。野生型片段裂解为59 bp 和201 bp 两个片段，而ACADSB c.1165 A>G突变无BtsC I识别位点，PCR产物仍为260 bp。

1.4 统计学处理

采用SPSS 20.0软件处理数据。通过绘制受试者操作曲线（ROC）评估串联质谱检测时以C5酰基肉碱浓度为0.44 μmol/L 作为截止值时的特异性和敏感性。利用Hardy-Weinberg 方程预测江门地区新生儿中ACADSB c.1165 A>G 的纯合性和杂合性。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况

81 452 例新生儿中共检测出97 例C5 酰基肉碱截止值≥0.44 μmol/L，其中IVA 5 例，SCADD 92 例。92 例SCADD 确诊病例中，出生后（47±7）h 进行初筛，收集的血液样本中C5 酰基肉碱浓度为（0.69±0.03）μmol/L（0.44～2.05 μmol/L）。出生后（527±66）h复查，C5 酰基肉碱浓度为（1.24±0.06）μmol/L（0.52～3.56 μmol/L）。两次筛查中，分别有13 名和73 名C5/C3和C5/C2比值升高。5例IVA 患者出生后（32±9）h进行初筛，C5 酰基肉碱浓度为（3.18±0.37）μmol/L（2.41～4.15 μmol/L）。92例SCADD确诊病例中，74例（80.4%）进行了ACADSB c.1165 A>G 突变分析，其中，69 个为纯合子（93.2%），3 个为杂合子（4.1%），另外2个为野生型（2.7%）。

2.2 新生儿筛查分析

1 130例汉族新生儿筛查样本中，876例（77.5%）为野生型，248 例（22.0%）为杂合子，6 例（0.5%）为常见c.1165 A>G 突变纯合子，见表1。基于Hardy-Weinberg方程预测的纯合性和杂合性分别为0.5%和22.0%。ROC 曲线结果显示，C5 酰基肉碱浓度截止值为0.44 μmol/L 时的敏感性和特异性分别为60.0%和100.0%。截止值降至0.20 μmol/L时可以检测到所有新生儿纯合子c.1165A>G 突变，但出现74 个假阳性，及5 个真阳性未被发现。截止值从0.44 增至0.60 μmol/L 时，筛查阳性数目从9 个减少到7 个，敏感性从60.0%降低至46.7%。以C5 酰基肉碱浓度截止值>0.60 μmol/L，及C5/C2 和C5/C3 比值<1.0 时每年筛查阳性的数量会进一步减少到5个。见表2。

表1 江门地区1 130份汉族新生儿筛查样本中的ACADSB c.1165 A>G突变分析

表2 不同C5酰基肉碱截止值筛查江门地区汉族婴儿c.1165A>G突变纯合性的结果分析

3 讨论

本研究旨在估计江门地区汉族婴儿SBCADD 的患病率，确认人群中SCADD 与c.1165 A>G 突变的关系。很显然，如果诊断是基于c.1165A>G 突变的纯合性检测，SCADD 的发病率很高，约为每1 000 例新生儿中有13 例。本研究的一个重要优势是以一个大的人口为基础的新生儿筛查样估计c.1165 a>G 突变的患病率以及不同C5浓度截止值对检测该突变的有效性，从而保证结果的准确性。但是，一个重要的限制是该分析仅限于鉴定c.1165 A>G突变，并且分析仅限于匿名新生儿筛查样本，不包括与SCADD 或c.1165 A>G突变相关的临床结果信息。

由于异戊酰肉碱与2-甲基丁酰肉碱难以区分，因此C5 浓度、C5/C3 和C5/C2 比值升高也可能是IVA 的标志[6-7]。虽然SCADD 的临床结果尚不清楚，但众所周知IVA 在婴儿早期会引起代谢性酸中毒，通常需要长期饮食管理[8-9]。因此，区分这两种疾病很重要。本研究样本中，诊断为SCADD 或IVA 婴儿的初始C5 浓度值存在相当大的重叠。其中，IVA 的C5 酰基肉碱浓度范围为0.68～19.0 μmol/L，表明C5酰基肉碱截止值需要设定在0.68 μmol/L 以下，以防止错过IVA 的潜在阳性筛选。本研究中当C5 酰基肉碱截止值为0.44 μmol/L 时有6 名c.1165A>G 纯合突变的婴儿未被检测到，表明汉族SCADD 婴儿的C5 值范围更大。为检测出所有纯合突变的婴儿，需将C5 截止值降至0.20 μmol/L。在该临界值下，特异性会下降到93.4%。

此外，本研究结果提示串联质谱技术测定C5 酰基肉碱水平有助于区分SCADD 和IVA。初始筛查为SCADD的92名患者中仅13名的C5/C2和C5/C3 比值分别高于既定的0.05 μmol/L 和0.50 μmol/L，而初始筛查为IVA 的患者全都满足，因此初始筛查中C5/C2 和C5/C3 比值无升高表明更可能为SCADD。若筛查C5≥0.60μmol/L且C5/C2和C5/C3比值提高<1.0μmol/L，则认定为SCADD阴性，该策略将C5酰基肉碱的升高数量减少了80%。但是为了防止使用这些更严格的标准无法识别IVA，可以期望每年平均有5 个纯合c.1165 A>G 突变的婴儿仍能筛查阳性，因此需要进一步诊断检测以排除IVA[10-11]。