潘张磊，王瑞珩，刘跟莉

(黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001)

溃疡性结肠炎(UC)是一种慢性、复发性、特发性的结肠和直肠炎性疾病，其发病机制复杂，宿主免疫应答异常、肠道屏障功能障碍、肠道菌群失调、环境和其他因素均与该病的发生有关[1-2]。粪便菌群移植是将健康供体粪便转移至肠道微生物稳态失衡的患者体内以恢复肠道稳态的治疗方法，该疗法在艰难梭菌感染的治疗中得到认可[3-4]，且诸多研究表明粪便菌群移植具有治疗UC的潜力[5-6]。但有关影响粪便菌群移植疗效的因素和深入的作用机制研究甚少。芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor, AHR)信号通路是连接肠道菌群与黏膜免疫的关键信号通路，其在肠道菌群代谢物激活下发挥对调节性T细胞(Tregs)和辅助性T 细胞17(Th17)的调节作用[7]，但在粪便菌群移植治疗UC中的作用鲜有报道。本研究旨在通过探究移植菌液pH值对粪便菌群移植治疗UC小鼠肠道黏膜免疫的影响和AHR信号通路在其中的可能作用，为粪便菌群移植的规范化提供参考和为粪便菌群移植机制研究提供新思路。

1 实验材料与方法

1.1主要仪器和试剂 葡聚糖硫酸钠(DSS)购于MP Biomedicals公司；尿粪隐血试剂盒购于中国南京建成生物工程研究所；白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-17A(IL-17A) ELISA试剂盒购于abcam公司。EasySepTMMouse Naïve CD4+T Cell isolation试剂盒购于stemcell公司。CellXVivo Mouse Treg Cell Differentiation试剂盒和CellXVivoTMMouse Th17 Cell Differentiation试剂盒购于R&D公司。PrimeScriptTMRT reagent试剂盒、TB Green®PremixEx TaqTM试剂盒购于TAKARA公司。PCR仪为Bio-Rad公司iQ5。

1.2供体粪便质量控制和菌液制备 招募6名男性健康志愿者提供粪便滤液，要求年龄20～30岁，排便规律，依从性良，无与肠道菌群变化有关的疾病，1个月之内未服用过抗生素或益生菌，均进行粪便检测，自愿签署书面知情同意书。……