刘 刚，任国臣，杨晓萍

(石河子大学医学院第一附属医院，新疆 石河子 832000)

目前慢性肾脏病在人群中的发病率逐年升高，我国成人人群中慢性肾脏病患病率为10.8%[1-2]。慢性肾脏病已成为严重危害人类健康的公共问题，患者的治疗耗费了巨额的医疗资源，给家庭和社会造成了沉重的负担。研究表明，活性维生素D3具有抑制肾小球系膜细胞增殖，促进细胞凋亡的作用，许多凋亡基因参与了肾小球系膜细胞凋亡，其中以Bcl-2为代表的一组凋亡调节基因对细胞凋亡起着至关重要的作用[3-5]。为进一步深入探讨活性维生素D3对系膜细胞的作用机制，本实验观察了活性维生素D3对体外培养的人肾小球系膜细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响，以期为其临床运用提供理论依据。

1 实验材料与方法

1.1细胞株与试剂 人肾小球系膜细胞株(湘雅医学院中心实验室提供)。磷酸酶抑制剂、PMSF、BCA蛋白浓度测定试剂盒(上海碧云天生物公司)，胞质胞核蛋白提取试剂盒(南京凯基生物公司)，蛋白Marker(北京全式金生物公司)，兔多抗GAPDH(杭州贤至生物公司)，兔单抗Bcl-2(CST)，兔多抗Bax(武汉三鹰生物公司)，细胞凋亡检测试剂盒(南京凯基生物公司)，1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3，Sigma公司]，MEM粉剂(GIBCO公司)。

1.2仪器与设备 超净工作台(苏州集团安泰空气技术有限公司)，CO2恒温培养箱(SANYO)，倒置相差显微镜(日本OLYMPUS公司)，低速离心机(Eppendorf)，流式细胞仪(Beckmancoulter)，酶标仪(Thermo)。

1.3实验方法

1.3.1细胞培养 将人肾小球系膜细胞从液氮中取出，复温后用含10%胎牛血清的完全培养基在37 ℃、 5% CO2饱和湿度条件下培养。……