严其高，祁冰洁，刘慧娟，刘金林，刘 毅

(安庆医药高等专科学校教务处，安徽 安庆 246052)

毛囊的周期发育过程是一个复杂的生理调控网络，受到大量的细胞因子以及细胞信号通路的相关因子的调控及影响[1]。据报道，体内的内分泌激素、机体的营养状态、环境因素等均参与了毛囊周期性发育过程[2]。褪黑素最初是Lerner于1958年首次从牛的松果体中分离出来后被发现，目前得到证实的是，褪黑素由生物体的松果体分泌，本质上属于吲哚类的神经内分泌性激素及抗氧化剂，能够刺激毛囊干细胞向毛囊细胞分化，促进其增殖及迁移[3]。为了进一步探索褪黑素对毛囊干细胞的影响以及相关机制，本研究探讨褪黑素是否能够通过激活典型的Wnt/β-catenin通路促进毛囊干细胞的增殖与迁移，从而进一步明确毛囊干细胞的有效调控物质和相关信号通路。

1 材料与方法

1.1材料 细胞：来自内蒙古自治区生物制造重点实验室分离纯化的内蒙古绒山羊毛囊干细胞所建立的P3代绒山羊毛囊干细胞系。试剂：高糖DMEM培养基、10 %胎牛血清、胰蛋白酶购于美国Gibco公司，褪黑素购于美国Sigma公司，IWR-1(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂)购于美国MedChemExpresss公司，CCK8实验试剂盒购于上海生工有限公司，Transwell细胞迁移实验试剂盒购于美国eBscience公司，Western-blot试剂盒购于美国Sigma公司，β-连环蛋白(β-catenin)、淋巴细胞增强结合因子1(Lymphoid Enhancer-binding Factor-1，LEF-1)蛋白一抗购于美国Santa Cruz Biotechnology公司。仪器：超净工作台(HEAR GU ARD ECO，苏州净化设备厂)；蛋白电泳仪、转膜仪购于BIO-RAD公司；紫外分光光度计购于上海仪天科学仪器有限公司。……