翁沛华

广州市第一人民医院(广州 510180)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，化疗是各期病程的乳腺癌治疗的重要手段，乳腺癌的化疗药物也得到了不断的发展和补充。阿霉素是目前临床乳腺癌治疗中广泛应用的化疗药物之一。然而，约有70%的乳腺癌患者对其耐药或很快出现化疗耐药。miRNA通过与靶基因mRNA分子的3端非编码区(3’UTR)结合，抑制基因表达，参与调控生物生长和发育等过程。其中，miR-128被报道与许多肿瘤发生发展和耐药相关，然而其在乳腺癌阿霉素耐药中的作用和具体机制仍不明确。此外，多数靶向药物或小分子因为无法实现在肿瘤部位的靶向聚集并渗透到肿瘤内部，导致治疗乳腺癌效果不佳。超声-微泡携带药物或基因靶向治疗肿瘤是近年来超声分子影像学的研究领域的热点，在肿瘤早期的检测和疗效评价方面具有可观的应用前景。因此，探索超声-微泡介导miR-128在乳腺癌阿霉素中的作用和具体分子机制具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 实验材料

胎牛血清和RPMI 1 640培养基购买自GLIBO公司，RNA提取试剂盒购买自AMBION公司，逆转录试剂盒和荧光定量PCR(quantitative PCR，qPCR)试剂SYBR Green购买自Roche，CCK8试剂盒购买自Roche，miR-128和β-actin的PCR引物购买自锐博生物。

1.2 细胞培养

人乳腺癌细胞MCF-7和阿霉素耐药细胞系MCF-7/ADM，用含10%胎牛血清的RPMI 1 640培养基并置于37 ℃、5% CO2的细胞培养箱内，取对数期、生长状态良好的细胞进行实验。

1.3 制备载miR-128阳离子脂质微泡

制备阳离子脂质微泡，每次实验前，通过阳离子微泡和miR-128孵育后进行DNA琼脂糖凝胶电泳的实验，测试出二者最佳孵育比例，每次处理细胞前，按每1 μg质粒与107～108个的微泡的比例共同孵育miR-128和阳离子脂质微泡30 min，得到载miR-128阳离子脂质微泡。……