魏志华 郭婷婷 王新民

摘 要：分别采用HPLC法和UV-Vis法测定了不同产地连翘中有效成分（连翘苷、连翘酯苷A和总黄酮）含量及其浸出物含量。结果表明，各产地老翘和青翘中的浸出物、连翘苷含量和连翘酯苷A含量均符合药典中的限量要求。青翘浸出物远高于老翘浸出物，老翘和青翘进行无梗处理后，山西陵川无梗老翘中的浸出物含量提高较明显，其余无梗老翘无明显变化。山西陵川无梗老翘中，连翘苷和连翘酯苷A含量分别高达0.88%、0.69%，所有老翘和青翘样品所含连翘苷和连翘酯苷A在去梗前后无明显变化。老翘和青翘的总黄酮含量在去梗后均出现降低趋势，而老翘总黄酮含量明显低于青翘总黄酮含量。说明连翘有梗与无梗对连翘苷和连翘酯苷A含量的影响较小，连翘药材在加工炮制时不需要进行去梗操作。

关键词：连翘;活性成分;HPLC;UV-Vis

中图分类号 F311文献标识码 A文章编号 1007-7731（2021）22-0051-02

連翘为木犀科植物连翘[Forsythia suspensa （Thunb.） Vahl]的干燥果实，始载于《神农本草经》，具有清热解毒、消肿散结之功效。传统上常常把连翘分为青翘和老翘2种商品规格，但目前市场上出现了有梗连翘和无梗连翘2种商品规格，两者价格差异较大。《中华人民共和国药典》中并未对有梗连翘和无梗连翘进行区分，两者质量是否有存在差异也尚未见相关报道[1-3]。为此，本实验通过研究有梗连翘和无梗连翘的质量差异，为连翘生产及应用提供参考。

1 仪器与试材

试验所用主要仪器有莱伯泰科LC-600型高效液相色谱、北京普析TU-1810紫外分光度计、高速粉碎机、超声波清洗器、烘箱及电子天平等。

试验材料于2019年8月和10月分别采自山西陵川、河南济源和河南栾川。8月采摘的尚未成熟的绿色连翘在锅中蒸30min，取出晒干，加工成青翘，10月采摘的成熟果实晒干加工成老翘，每个产地的老翘和青翘一部分做去梗处理，一部分不去梗，备用。

连翘苷对照品（上海源叶生物科技有限公司），连翘酯苷A对照品（上海源叶生物科技有限公司），芦丁对照品（上海源叶生物科技有限公司），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），65%乙醇（分析纯），冰乙酸（分析纯），磷酸（分析纯），超纯水。

2 试验方法

2.1 样品处理 把每个产地的有梗老翘、无梗老翘、有梗青翘、无梗青翘分别粉碎，过2号筛，备用。

2.2 浸出物含量测定 取样品约4.0g，精密称定，置250mL的锥形瓶中，精密加65%乙醇100mL，密塞，冷浸，前6h内时时振摇，再静置18h，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量。3次重复。

2.3 连翘苷和连翘酯苷A含量的测定 样品溶液的制备：精密称取各样品粉末约2.0g，分别置于具塞锥形瓶中，加入95%甲醇30mL浸泡2h，超声提取25min，放冷后用漏斗过滤，滤液再用0.45?m微孔滤膜过滤于标记过的离心管中，待用[4]。

对照品溶液的制备：用十万分之一电子天平精密称取连翘苷和连翘酯苷A对照品2.25mg和2.16mg，分别置于10mL的容量瓶中，先用少量的无水甲醇溶解，再用超声溶解法处理10min，放冷后用无水的甲醇定容，制成0.225mg/mL的连翘苷对照品溶液和0.216mg/mL的连翘酯苷A对照品溶液;经0.45?m微孔滤膜过滤，待用[4]。

色谱条件：色谱柱LabTech-C18（150mm×4.6mm，5μm）;测连翘苷时流动相为乙腈-水（25∶75），检测波长为277nm，测连翘酯苷A时流动相为乙腈-0.4%冰乙酸（15∶85），检测波长为330nm;流速为lmL/min;柱温为室温[5，6]。

按上述色谱条件，各进样20?L，按照色谱峰峰面积计算含量。

2.4 总黄酮含量（以芦丁计）的测定 芦丁对照品溶液的制备：精密称取芦丁的标准品2.8mg，置于50mL容量瓶中，用80%甲醇溶解并定容，摇匀，所得浓度均为0.056mg·mL-1，备用。

标准曲线的制备：分别精密量取芦丁对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mL置于10mL容量瓶中，定容至刻度线。在327nm波长处测其吸光度值[7]。以芦丁浓度（mg·mL-1）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制芦丁的标准曲线。

芦丁含量的测定：称取各样品粉末2g，分别置于标记过的具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇30mL，密塞，在60℃超声辅助提取50min，放冷，过滤，吸取提取液1mL，置于50mL容量瓶中，定容。在327nm波长处测其吸光度，根据回归方程计算芦丁浓度[7]。

3 结果与分析

中国药典规定了连翘醇溶性浸出物含量，青翘不得小于30.0%，老翘不得少于16.0%。由表1可知，3产地的老翘和青翘中浸出物含量均符合药典中的限量要求。3产地老翘和青翘中连翘苷含量在0.46%～0.88%，连翘酯苷A含量在0.40%～0.69%，分别大于0.15%和0.25%中国药典的限量要求;而其总黄酮含量在19.03%～25.87%。

通过对3产地连翘浸出物含量比较，发现青翘浸出物远高于老翘浸出物，而山西陵川无梗青翘浸出物最大，达43.12%，而河南栾川有梗老翘浸出物含量最低为25.48%;3个产地老翘进行无梗处理后，无梗老翘的浸出物含量有一定程度提高，3个产地中只有山西陵川无梗连翘中浸出物含量提高较明显，河南济源的无梗老翘和河南栾川的无梗老翘增幅不明显。3个产地的青翘进行去梗处理后其浸出物含量和老翘表现基本一致，均略有增加。

3产地老翘中山西陵川无梗老翘中连翘苷和连翘酯苷A含量分别达0.88%、0.69%，在所有连翘样品中含量最高;而山西陵川无梗老翘中连翘苷和连翘酯苷A含量均为0.62%，在所有老翘中最高;河南栾川有梗老翘中连翘苷和连翘酯苷A含量分别为0.46%、0.40%，含量最低。所有老翘样品所含连翘苷和连翘酯苷A在去梗前后无明显变化，去梗后的老翘中连翘苷含量略有增加，青翘去梗后连翘苷和连翘酯苷A含量也无明显变化。比较3个产地的老翘及青翘中2种成分含量，在老翘和青翘中均以山西陵川的含量较高;连翘苷和连翘酯苷A是连翘质量的主要评价指标，试验结果与历来认为山西陵川连翘质优的观点相符合。

本试验中，3产地老翘中总黄酮含量低于青翘，河南栾川无梗老翘中总黄酮含量最低，为19.03%，而山西陵川有梗青翘总黄酮含量最高，为25.87%。3产地老翘和青翘总黄酮含量在去梗后均出现降低趋势。

4 讨论

无梗连翘是近年在中药材市场出现的一种商品规格，去梗后的连翘从外观上看更加洁净，价格常高于有梗连翘，但通过实验发现去梗后的连翘浸出物含量、连翘苷及连翘酯苷A等评价指标变化并不明显，对连翘药材的质量影响不大。另外，去梗需要耗费大量的人工，增加人工成本，再者连翘在采收过程中由于机械外力作用，常常可以造成部分果梗脱落，无须专门做无梗处理。另外，不同产地的连翘质量存在一定差异，连翘的成熟度不一样，其主要质量评价指标差异较大，建议在临床应用时区别对待。

当前，中国药典中尚未规定连翘药材中总黄酮含量测定项目。本实验对其进行了测定，老翘中总黄酮含量普遍低于青翘，可能与部分老翘成熟后果实开裂造成种子脱落有一定关系，也可能与黄酮类成分在连翘果实中的积累规律有关，尚需进一步研究。

参考文献

[1]中国药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社.

[2]陈瑾，谭丽媛，张淑蓉，等.不同产地连翘主要成分分析及抗菌作用研究[J].时珍国医国药，2018，29（2）：427-430.

[3]阎新佳，温静，项峥，等.连翘的化学成分研究[J].中草药，2017，48（4）：644-647.

[4]郭伟良，由鹏飞，房晶，等.响应面法优化连翘苷超声提取工艺[J].中国医药工业杂志，2009，40（12）：919-923.

[5]李玉兰，高美华.HPLC测定不同产地连翘中连翘苷和连翘酯苷的含量[J].中国医学工程，2010，18（2）：46-52.

[6]齐迎春.连翘中芦丁和连翘酯苷A的含量测定方法分析[J].中国现代药物应用，2014，8（11）：245-246.

[7]王润梅，张永芳，刘丽敏，等.响应面法优化连翘总黄酮提取工艺研究[J].山西大同大学学报（自然科学版），2017，33（02）：50-54.

（责编：张宏民）