刘华栋，李婷婷，唐 娟，丁树荣，陆冰洋，王彩先

（山西农业大学动物医学学院，山西太原030032）

新城疫（newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（newcastle disease virus，NDV）感染引起的一种传染性疾病，以高发病率和高病死率为特征，严重危害养鸡业的发展。因疫苗的研制及应用，新城疫的流行和传播受到控制。但NDV也通过不断地变异，使得疫苗的保护力不足，导致鸡群发病率有所升高[1]。

NDV基因组可编码6种结构蛋白，分别是NP核蛋白、F融合蛋白、M基质蛋白、P磷蛋白、HN血凝素-神经氨酸酶和L聚合酶，其中F融合蛋白与NDV的致病性和免疫应答过程具有相关性，在其中起重要作用[2]。本研究从山西省不同养殖场分离鉴定了4株病毒，对其F基因序列进行研究，确定分离到的病毒均为基因Ⅱ型弱毒株，并进行了生物学毒力测定和动物回归试验。以期确定山西地区当前NDV流行毒株的基因型以及毒力强弱，为本病的防控和病原的净化提供参考。

1 材料与方法

1.1 病料来源

病料采集于山西地区不同养殖场。采用灭菌生理盐水将棉签浸湿，在发病鸡的喉头和泄殖腔内旋转轻触，将得到的咽肛拭子置于1.5 mL灭菌离心管，加入含有50%甘油的生理盐水，标记，保存。无菌取病死鸡的肝、脾、肺等器官，置于一次性封口袋中并标记，－20℃保存。

1.2 试剂与培养基

新城疫病毒通用型RT-PCR检测试剂盒、RNA提取试剂盒，均购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司；M-MuLV First Strand cDNA Synthesis Kit M-MuLV第一链cDNA合成试剂盒（BS249）、6×DNA Loading Dye、Marker、DreamTaq DNA聚合酶、PCR产物纯化回收试剂盒（SK1131）、蔗糖、琼脂糖、琼脂粉、营养琼脂、阿氏液，均购自生工生物工程（上海）股份有限公司；……