程 旭，姜 逸，高明燕，周 生，俞 燕，李建梅，沈欣悦，范建华

（中国农业科学院家禽研究所，江苏扬州225125）

鸡传染性支气管炎是严重威胁养殖业的疫病之一，接种疫苗是目前最有效的预防措施。传统胚苗存在潜在外源病毒污染、病毒传代变异、后期鸡胚污染等问题，因此细胞苗是当前疫苗研发的主要方向。随着细胞需求量及产业化需要，大方瓶或转瓶已无法满足生产企业的需求。悬浮培养能够提高细胞培养的质量和病毒表达量[1]，克服了传统贴壁培养细胞生产的单批产量不高、批间差异大、产品质量不稳定、生产成本高和污染概率高等缺陷，节省人力成本，提高病毒增殖效率[2]。Vero细胞是WHO推荐兽用疫苗生产的传代细胞系，可通过生物反应器实现规模化培养。本研究采用QX型鸡传染性支气管炎病毒（IBV）毒株MJ株开展Vero细胞悬浮培养，取得最佳培养参数，为IBV细胞苗的研发提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验细胞及毒株

Vero细胞及IBV细胞适应株MJ株均为中国农科院家禽研究所保存。

1.1.2 试剂与设备

试剂：微载体Cytodex-1（美国GE Healthcare公司）、胎牛血清DMEM（浙江天杭生物科技股份有限公司）、MEM（美国Gibco公司），其他均为国产分析纯试剂。

设备：Countess II全自动细胞计数仪（美国赛默飞公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 生物反应器及Cytodex-1的前处理

超纯水冲刷清洗干净的生物反应器2遍。烘干后在生物反应器内壁均匀涂抹甲基二氯硅烷，然后放入180℃烘干箱内2 h。室温条件下将适量的微载体Cytodex-1倒入PBS中浸泡2 h，弃掉上清，PBS冲洗2遍。

1.2.2 最佳微载体浓度试验