朱磊 付攀 王立莎

(湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院 1心血管内科，湖北 襄阳 441000；2放射影像科)

心肌梗死(MI)是致死率最高的心血管疾病之一，持续性的心肌缺血引起的缺氧是引起心肌梗死时细胞凋亡的主要原因〔1〕。因此，如何有效地增强心肌细胞活力、减少心肌细胞凋亡、改善血流障碍是治疗心肌梗死的重要策略。B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)基因是Bcl-2家族成员之一，其编码的Bax蛋白通过诱导细胞色素c的释放，激活含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3介导的细胞凋亡信号通路，促进细胞凋亡〔2,3〕。研究表明芹菜素和黄芩茎叶总黄酮通过下调Bax表达对缺血或缺氧造成的心肌细胞凋亡有一定的保护作用〔4,5〕。miRNAs是一类内源性非编码小RNA，在转录后水平参与调控各种生物学过程。何淑芳等〔6〕在用芯片法筛选缺氧处理诱导大鼠心肌细胞差异表达的miRNA时发现，缺氧可以下调大鼠心肌细胞中miR-374-5p的表达。但miR-374-5p对缺氧诱导的大鼠凋亡的影响且miR-374-5p能否介导Bax表达参与对缺氧诱导的大鼠凋亡的调控目前并不清楚。本实验以H9c2细胞缺氧处理建立细胞模型，旨在探讨miR-374-5p对缺氧诱导心肌细胞凋亡的影响及其可能的调控机制。

1 材料与方法

1.1主要实验材料、试剂与仪器 大鼠心肌细胞H9c2和CP-R073购自ATCC；胎牛血清、DMEM培养基及1%青/链霉素购自美国Hyclone公司；LipofectamineTM2000相关转染试剂和Trizol试剂购自美国Invitrogen公司。miR-NC、miR-374-5p、pcDNA3.1、pcDNA3.1-Bax、WT-Bax和MUT-Bax由上海生工生物工程有限公司构建和测序；miR-374-5p、Bax、U6和GAPDH引物购自广州锐博公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega公司；……