杜娜 贾桂枝 戴红良

(锦州医科大学 1附属第一医院心血管内科，辽宁 锦州 121001；2生理学教研室；3社区护理学教研室)

氧化应激在心力衰竭、心肌缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化、心房纤颤等众多心血管疾病的发病机制中都起着关键性的作用〔1～3〕。氧化应激导致活性氧(ROS)的过度生成，进而引起心肌细胞的明显损伤和凋亡〔4〕。因此，深入了解氧化应激对心肌细胞凋亡的影响及其潜在机制对于进一步揭示心血管疾病的发病机制至关重要。当心肌细胞在受到各种伤害性刺激时，会通过自分泌或旁分泌的形式释放某些促存活细胞因子，发挥自我保护作用〔5〕。研究发现氧化应激在直接诱导心肌细胞凋亡的同时，负反馈性地诱导心肌营养素(CT)-1表达的上调，从而在一定程度上间接缓解了心肌细胞的凋亡〔6〕。本研究探讨氧化应激诱导心肌细胞CT-1表达上调的机制及其对心肌细胞凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1主要试剂与仪器 胰蛋白酶、DMEM培养基、H2O2、AG1478、PP1、GM6001、LY294002(Sigma公司)；胎牛血清(FBS，美国Gibco公司)；CT-1抗体(美国Abcam公司)；蛋白激酶B(AKT)、磷酸化p-AKT抗体(美国Proteintech公司)；AnnexinV-碘化丙啶(PI)凋亡试剂盒(北京宝赛生物有限公司)；二氧化碳培养箱、酶标仪(美国Thermo Fisher Scientific公司)、流式细胞仪(美国BD公司)；电泳仪及转膜仪(美国Bio-Rad公司)。

1.2细胞培养及分组 H9C2大鼠心肌细胞系购自中科院上海细胞库。用含有10% FBS的DMEM，在37℃，5% CO2，饱和湿度下进行常规培养。用200 μmol/L H2O2处理H9C2细胞15～60 min,分别记为H2O215 min组、H2O230 min组、H2O245 min组、H2O260 min组，以不加H2O2处理作为对照组。细胞先以不同抑制剂预处理细胞30 min，随后加入200 μmol/L H2O2继续共处理24 h,分别记为对照组、 H2O2组、AG1478+H2O2组、PP1+H2O2组、LY294002+H2O2组。……