陈艳芳 贾贺 李富慧 黄景贺

(1南阳市中心医院神经内科，河南 南阳 473000；2郑州大学第二附属医院老年病科)

动脉粥样硬化(AS)是一种发病率和死亡率都较高的慢性血管性疾病，脂质代谢障碍是其病变的基础，动脉壁变厚、血管腔变窄，最终导致组织缺血或坏死，随着治疗方法的改进，患者病死率略有下降，但死亡总数仍不断上升〔1,2〕。研究氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤修复的分子机制，为AS靶向治疗提供理论基础。 研究表明，miR-146b-3p 在高糖诱导的HUVECs中〔3〕、缺血再灌注损伤大鼠脑皮质〔4〕和糖尿病性脑梗死患者〔5〕中均表达下降，药物利拉鲁肽可能通过上调miR-146b-3p 表达改善炎症和血管内皮功能。生物信息学预测发现，前蛋白转化酶枯草溶菌素(PCSK)9可能是miR-146b-3p的下游靶基因。oxLDL、高脂血症和心肌缺血再灌注损伤均能上调PCSK9 mRNA 和蛋白质的表达，诱导HUVECs、apoE (-/-)小鼠海马神经元或心肌细胞凋亡〔6～8〕。但miR-146b-3p在oxLDL诱导的HUVECs损伤中的表达和影响及其是否靶向调控PCSK9影响oxLDL诱导的HUVECs损伤目前还尚未可知。本研究旨在探讨过表达miR-146b-3p通过靶向调控PCSK9表达对oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1材料 HUVECs购自北京北纳生物；胎牛血清(FBS)、F-12培养基和内皮细胞生长添加剂(ECGS)购自美国Gibco公司，胰蛋白酶和肝素购自Sigma-Aldrich公司；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司；双荧光素酶报告系统购自美国Promega公司；总RNA提取试剂盒、反转录试剂盒〔RT-聚合酶链反应(PCR)〕、实时荧光定PCR试剂盒和Lipofectamine 2000转染试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司；……