曹斌

(莱芜市人民医院急诊科，山东 莱芜 271100)

肝癌是威胁人类生命安全的恶性肿瘤之一，大部分患者就诊时已处于中晚期，研究表明肝癌细胞增殖、基质黏附及侵袭能力与患者预后不良密切相关〔1，2〕。研究表明花姜酮(Zerumbone)可抑制肝癌、乳腺癌等肿瘤细胞增殖及侵袭〔3，4〕。但关于Zerumbone对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用机制尚未完全阐明。微小RNA(miRNA)在多种肿瘤中异常表达，并参与肿瘤进展，研究表明miR-490-3p在卵巢癌、肝癌等肿瘤细胞中呈低表达〔5～7〕。Targetscan预测显示B细胞淋巴因子(Bcl)-w可能是miR-490-3p的靶基因，Bcl-w在多种肿瘤中发挥促癌基因作用〔8〕。本研究主要探讨Zerumbone对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响，并分析其对miR-490-3p/Bcl-w的调控作用。

1 材料与方法

1.1材料与试剂 Zerumbone购自上海甄准生物科技有限公司(货号：ZPG-83418，规格：20 mg)；肝癌细胞Hep3B购自上海通派生物科技有限公司。pcDNA3.1购自上海索宝生物科技有限公司；Lipofectamine2000购自美国Invitrogen公司；Transwell小室购自美国Corning公司；基质胶购自美国BD公司；MTT购自上海歌凡生物科技有限公司；细胞凋亡试剂盒购自上海朗智生物科技有限公司；兔抗人细胞周期蛋白(CyclinD)1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved caspase)-3抗体购自美国Cell Signaling Technology公司；兔抗人Bcl-w抗体购自美国Santa Cruz公司；二抗购自北京中杉金桥生物技术有限公司；荧光素酶活性检测试剂盒购自美国Promega公司；Trizol试剂、反转录与SYBR Green试剂盒均购自北京天根生化科技有限公司。

1.2实验处理与分组 Zerumbone溶解于200 μl二甲基亚砜(DMSO)，用DMEM培养基稀释为实验所需浓度7.5 μmol/L、15.0 μmol/L、 30.0 μmol/L。取对数生长期Hep3B细胞，用……