林颜 阮树斌 陈晓东 杨荣华 王婧薷 林泽鹏 信琪

(佛山市第一人民医院烧伤整形创面修复外科，广东 佛山 528000)

瘢痕疙瘩形成过程主要涉及瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖活力增强及细胞凋亡能力不断削弱等过程，而皮肤伤害或持续性刺激均可造成瘢痕疙瘩〔1〕。目前关于瘢痕疙瘩发病机制尚未完全阐明，导致瘢痕疙瘩的治疗成为医学难题〔2〕。因此，如何抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖并促使其凋亡成为主要研究领域。研究表明微小RNA-214(miR-214)在瘢痕疙瘩中表达水平显著低于正常皮肤组织，但其具体作用机制尚未见报道〔3〕。已有研究表明微小RNA-214-5p(miR-214-5p)在骨肉瘤和肝癌中均呈下调表达，miR-214-5p过表达可抑制骨肉瘤细胞和肝癌细胞增殖、迁移和侵袭〔4,5〕。但miR-214-5p对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡的影响尚未可知。利用生物信息网站预测miR-214-5p可能调控靶基因，发现分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)2在瘢痕疙瘩中呈高表达〔6,7〕。本研究通过miR-214-5p过表达与沉默SFRP2表达并观察人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡的变化。

1 材料与方法

1.1材料与试剂 胎牛血清(FBS)、RPMI1640培养基均购自上海博升生物科技有限公司；四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测试剂盒购自上海泽叶生物科技有限公司；二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒与Annexin V凋亡检测试剂盒均购自北京全式金生物技术有限公司；SFRP2抗体购自美国Santa Cruz公司；Trizol、逆转录及实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)试剂盒均购自大连宝生物科技有限公司；LipofectamineTM2000转染试剂购自美国Invitrogen公司；miR-214-5p mimic、miR-NC、si-SFRP2、si-NC均购自上海吉玛基因制药技术有限公司；……