陈天佑 熊飞 张倬 李雪曼

(武汉市第三医院胸外科,湖北 武汉 430060)

肺癌是全球癌症相关死亡的最常见原因，每年约有1 800万人被诊断出患有肺癌，大概1 600万人因该疾病而死亡〔1〕。目前，尽管肺癌的临床治疗取得了进展，患者的预后仍然不利，5年生存率约15%〔2〕，总体存活时间没有明显改善〔3〕。因此，迫切需要确定肺癌发展的潜在机制，并开发新的诊断生物标志物和治疗肺癌的有效策略。长链非编码RNA(LncRNA)是长度超过200个核苷酸的非蛋白质编码转录物，尽管大多数LncRNA的作用机制仍然未知，但越来越多的证据表明，LncRNA是多种生物过程中的重要调节因子，包括细胞生长和细胞凋亡等过程〔4，5〕。反义胰岛素样生长因子2(IGF2-AS)是LncRNA中的一种，研究发现IGF2-AS在胃腺癌组织中表达上调，通过调控微小RNA-503(miR-503)影响胃癌的预后和转移〔6〕。然而，关于IGF2-AS在肺癌中的表达及其功能，这方面的资料尚不多见。因此，本研究以肺癌细胞为对象，观察IGF2-AS在肺癌细胞中表达情况，利用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术等方法检测IGF2-AS对肺癌细胞增殖和凋亡的影响，并结合生物信息学预测其下游靶基因miR-370-3p揭示可能的作用机制，为IGF2-AS在肺癌诊断和治疗中的应用提供新思路。

1 材料与方法

1.1试剂和仪器 人肺癌细胞系H1299、A549、SPC-A-1、NCI-H446购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，正常肺表皮细胞HPL-1购自协和医科大学实验中心，DMEM培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司，TRIzol、Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司，si-IGF2-AS、pcDNA-IGF2-AS、miR-370-3p、anti-miR-370-3、荧光素酶报告载体购自上海GenePharma公司，MTT、RIPA裂解液购自美国Sigma公司，膜联蛋白(Annexin)V-FITC/碘化……