邱宏聪，赖克道，梁 冰，王 丽，黄 艳,2，刘布鸣,2

(1.广西中医药研究院，广西南宁 530022; 2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西南宁 530022)

0 引言

免疫系统最重要的核转录因子(NF-κB)广泛存在于多细胞有机体中，主要通过调控下游靶基因转录参与免疫炎症反应、细胞周期调控、细胞凋亡及细胞黏附等过程。NF-κB信号通路的异常激活通常会介导多种慢性炎症的发生[1,2]，而通路相关蛋白的突变则会导致遗传性疾病的出现或免疫病变，因此开展NF-κB信号通路的研究，在临床炎症的治疗中具有深刻的应用前景。

岗松富含槲皮素、杨梅素等黄酮组分[3-7]。岗松总黄酮(GSH)为本课题组开发的专利产品[8]，对体外培养的宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭具有明显的抑制作用，并促进其凋亡[9]，且能显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞中TNF-α及IL-6含量，下调iNOS、COX-2蛋白表达[10]。本研究将继续深入考察GSH对炎症因子IL-1β、IL-8、TGF-β，以及NF-κB信号通路中IκBα、NF-κB p65表达的影响，探讨GSH抗炎活性可能的作用靶点。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞及培养

小鼠RAW264.7单核巨噬细胞(购自中国科学院细胞库)，接种于含10%胎牛血清、100 U·mL-1青/链霉素的dMEM培养基中，然后置于5% CO2、37℃培养箱中培养。

1.1.2 药品与试剂

岗松药材采收于广西北海市，经广西中医药研究院姜平川研究员鉴定为岗松(BaeckeafrutescensL.)的干燥茎叶。MTT(SIGMA)，IL-1β、IL-8、TGF-β ELISA试剂盒(RB公司)，TRIZOL、TAQ、RNASE INHIB.、dNTP试剂(Life公司),β-actin抗体(江苏康为世纪生物科技股份有限公司),RIPA细胞裂解液(Thermo公司),PBS、蛋白酶抑制剂(Solarbio公司),预染蛋白marker(Formentas公司)；IκBα抗体(CST公司),碱性磷酸酶标记的马抗小鼠IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司),碱性磷酸酶显色试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司),超纯水；……