杨镇州，李妍，杨雪，刘刚，梁文

上海市计量测试技术研究院化学与电离辐射所生物计量实验室，上海201203

PCR作为分子生物学的核心技术，已逐渐发展为最普遍的核酸定性及定量的研究手段，广泛用于研究生物体基因表达水平、生长发育、疾病控制等领域[1−6]。逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription,RT-PCR）是将RNA的逆转录和cDNA的聚合酶链式扩增相结合的技术[7−9]。由于两个反应之间无需额外的开盖和缓冲液更换操作，实现了核糖核酸的一步法检测，具有可降低污染风险、提高检测速度、节省耗材、适用于高通量测定等优点，进一步推动了PCR技术基础的革新。

2019年，新型冠状病毒肺炎（coronavius disease 2019，COVID-19)疫情爆发后，我国卫生健康委员会发布的“新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案”[10]、美国疾病控制与预防中心发布的“实时荧光逆转录-聚合酶链反应检测2019新型冠状病毒”使用说明[11]、欧盟疾病控制与预防中心发布的“新型冠状病毒检测方法和目标”12]等，均以RTPCR检测阳性作为确诊的“金标准”。截至2020年11月3日，获国家药监局应急审批通过的新冠病毒核酸检测试剂盒主要为RT-qPCR检测试剂盒。但是在实际应用中，对于确诊患者的核酸检测，仍然出现了假阴性的问题，该结果一定程度上与核酸检测试剂盒的质量有关。在生产和保存环节中，酶易受保存温度、抑制剂等影响，因此，酶的质量是影响试剂盒性能的主要原因。

在RT-PCR反应过程中，涉及两种作用的酶，即逆转录作用的逆转录酶和聚合形成双链DNA的DNA聚合酶，如图1所示。……