HPLC法测定盐酸莫西沙星中R—异构体含量研究

2021-11-30孙江峰董艳华张小军

科学与信息化 2021年16期

孙江峰董艳华张小军

扬子江药业集团江苏海慈生物药业有限公司江苏泰州 225300

引言

盐酸莫西沙星是临床上常用的一种抗菌药物，有抗菌谱广、抗菌能力强、半衰期长、疗效好、副作用小及和其他抗菌药物之间不会形成交叉耐药性等特征，当下在国内实现商品化的有盐酸莫西沙星片、胶囊及注射液，多用于治疗成人呼吸道感染，也作为糖尿病、肾损伤患者的一种辅助性药物。从结构层面上分析，盐酸莫西沙星的分子内存有2个手性中心，有学者预测其可能存有4种异构体，4S、7S构型是当下临床准许应用的异构体，但制造阶段可能会引进少许的其他异构体，故而精准分离异构体与采用适宜的检查方法是很有现实意义的[1]。本文采用HPLC手性流动相添加剂法拆分异构体，检测相应的含量值。

1 仪器和试药

高效液相色谱仪（LC-2010C HT型），其内含有LCSolution色谱工作站。

盐酸莫西沙星对照品I（批号：Y 0 0 0 0 7 0 3，纯度达99.906%），R-异构体对照品II（批号：20110726，纯度99.820%）与原药（批号20110612、20110620与20110703）；硫酸铜；L-苯丙氨酸；选用蒸馏水、甲醇分别作为超纯水、色谱纯。

2 操作方法与结果分析

2.1 配制溶液

对照品II贮备液：准确称取10㎎对照品II，将其安置在10ml容量瓶内，添加流动相溶解并定容处理，便能配制出1㎎/ml对照品II贮备液[2]。

供试品溶液：取10㎎原药，置于10ml瓶中，操作方法同上制得1㎎/ml的供试品溶液。

2.2 色谱条件和适用性试验

Zorbax SB-C18色谱柱（4.5mm×150mm，5μm）；流动相：手性流动相添加剂溶液（750㎎硫酸铜+991.3㎎ L- 苯丙氨酸，添加适量蒸馏水溶解并定容到1L）—甲醇（39:11），流速1.0mL/min，柱温45℃，检测波长293nm；进样量10μL。

量取对照品I、II适量，添加流动相溶解并稀释制备成含有I 1㎎/ml、II 2μg/ml混合液，将其作为系统适用性试验用溶液。量取适量对照品II，溶解、稀释制得1μg/ml溶液。取以上两种溶液作为系统适用性溶液（含有异构体0.5%左右）。称量10μL以上系统适用性溶液，将其输注至液相色谱仪内，R-异构体和莫西沙星的留存时间分别是13.8min、16.6min，两者的分离度是3,.4，基于R-异构体峰进行计量，理论塔板数是4296。

2.3 线性关系分析

称取适量的莫西沙星R—异构体对照品，精准定容，添加溶剂溶解并稀释制得0. 55、1.10、2.20、2.75、5. 50μg/ml的系列溶液。准确量取以上系列溶液各10 μL，依次将其输注至液相色谱仪内，记录相应的色谱图。将峰面积（A：μV×s）、浓度（C：μg/ml）分别设定为纵、横坐标，以此为据进行线性回归分析，获得如下的线性方程：A=3. 926×105C-1. 566×105 r=0. 9995线性范畴是0.55～5.40μg/ml。

2.4 加样回收率试验

称取莫西沙星原药（批号20110612 其内R-异构体含量0.24%），大概24mg，精准称定，共计8份，依次将其置在50ml量瓶内，精确投用“系统适用性试验”下的R-异构体储备液0.5、1.0、1.5mL各3份，添加溶剂溶解并稀释到设计刻度，混合充分摇均，将其设定成异

构体回收率试验中的测试液。取适量测试液与R—异构体对照品各10μL，按序注入值液相色谱仪内，依照峰面积，利用外标法测算出回收率。统计结果发现，低、中、高浓度回收率（n=3）依次是98.3%、99.7%、99.6%；RSD依次是0.68%、0.92%、0.83%，平均回收率（n=8)达到了99.3%。

2.5 检测限与定量限

取适量R—异构体对照品溶液，适当稀释处理，进样检测。当信噪比（S/N）达到3时，检测得到R—异构体的检测限是1. 1 ng；当信噪比（S/N）是10时，检测出R—异构体的定量限是3. 5ng[3]。

2.6 进样精密度试验

取适量R—异构体对照品溶液，持续进样6次，检测R—异构体的峰面积，RSD（n=6）是0.29%。

2.7 溶液稳定性试验

称取原药（批号20110620）25㎎左右，精准定容，将其安置于50 mL量瓶内，添加适量溶解（超声波助溶）并稀释到设计刻度，摇匀，将其作为供试品溶液（0.5㎎/mL），考察分析溶液的稳定性。室温条件下分别安置0h、1h、2h、4h、6h、8h 以后分别进样10μL，记录相应的色谱图，其R—异构体峰面积的RSD（n=6）对应值是0.94%，提示在室温条件下本溶液持续放置8h内，依然能维持自身性质的相对稳定性。

2.8 重复性试验

量取相同批次试样（批号20110703），精准量取、定容，添加事前准备好的溶剂进行溶解及稀释处理，配制出浓度大概为0.5㎎/ml的6份供试品溶液，分别规范的检测R—异构体含量。通过结果发现R—异构体含量平均值（n=6）s 0.24%,RSD是2.6%，提示本课题研究中采用的HPLC法重复性优良。

2.9 测定R—异构体

即称取适量莫西沙星原药，添加试剂溶解及稀释处理，配制成浓度大概0.5㎎/ml供试品溶液，精准称取以上溶液及R—异构体对照品溶液各10μL，分别进样检测，形成的色谱图见图1，4频次样品内R—异构体含量依次是0.16%、0.24%、0.16%/0.27%。

3 讨论

3.1 选择与优化色谱条件

手性流动相添加剂法应用时把某种手性金属离子的配位体添加到色谱洗脱剂内，于某种非手性固定相之上拆分对映体。该种方法在确保分离度与较短分析时间的基础上，优化了配位离子Cu2+与手性配位体L-苯丙氨酸的浓度。流动相内甲醇的比例是影响留存时间与分离度的主要因素之一，当甲醇占比达到22%时，耗用的分析时间较短，并且分离度能符合设计要求。

3.2 溶剂的选择

先尝试用甲醇-水作为溶剂，分离度（R=2.3）与柱效（对照品I与II理论板数均在5000之上）都较好，但对照品II的进样精密度偏大（RSD3.7%， n=5），回收率偏高（平均值127.4%），很难满足定量分析的要求；当溶剂调换成内含手性添加剂的流动相时，能取得较理想的分析结果，确保测量结果有较好的重现性。