张 苹，翟建昭，刘在栓，赵旭东 综述，武永康△ 审校

四川大学华西医院：1.实验医学科；2.肿瘤动物模型创制及应用研究室，四川成都 610041

嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(CAR-T)是过继性免疫治疗方法之一，通过对T细胞进行修饰，使T细胞表达靶向肿瘤抗原的嵌合抗原受体(CARs)，从而特异性识别肿瘤抗原，清除癌细胞，达到临床缓解甚至是根治肿瘤的目的[1]。CAR-T细胞制造中，CARs的设计和基因转导是两个重要方面，前者着重于CARs本身的构造，不同的CARs结构在诱导信号传导、发挥细胞效应等方面不同，通过CARs结构的优化，可以达到特异性、亲和性及毒性之间的平衡，增加抗肿瘤效应[2]。后者强调基因转移的效率、安全性，并与CAR-T的治疗成本相关。CAR-T产品的制造昂贵、费时，并且复杂多样。完整的CAR-T细胞制造流程如下：首先，对患者或捐献者外周血中T细胞分离、富集及激活;其次，将编码目的基因的CARs在体外与T细胞进行基因转导获得CAR-T细胞，然后对CAR-T细胞进行扩增以达到临床治疗所需剂量;最后,再应用于临床治疗[3]。

1 CARs的基本构造及演变

CARs这一概念在1989年由GROSS等[4]在研究中首次提出，它是一个合成受体蛋白，由识别并结合靶抗原的单链可变片段(scFv)的胞外区、铰链区、跨膜区及CD3ζ链组成的胞内区4部分组成[5]。根据胞内区的结构不同，CARs分为4代[6]：第1代CARs只有传导活化信号的CD3ζ链或FcεRIγ，缺乏持久性及增殖能力；第2代CARs在第1代的基础上添加了共刺激分子CD28、4-1BB、OX40、ICOS等，满足T细胞活化的2种信号，是应用最广泛的CARs；第3代CARs将共刺激分子增加到2个,在研究中显示出了更强的体外激活及增殖能力[7]；……