孙阳，孙悦，吴勃岩，陶雪莲，姜德友

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

齐墩果酸(Oleanolic Acid,OA)是五环三萜类化合物，它是一种天然化学成分，存在于多种植物药物中[1-3]。中药复方贞术消积汤，由女贞子、夏枯草、白花蛇舌草、莪术和甘草组成，其中君药女贞子、臣药白花蛇舌草和夏枯草均含有齐墩果酸。课题组研究证实该复方对肝癌有抑制作用[4]。文献报道，齐墩果酸可以抑制HepG2肝癌、结肠腺癌、膀胱癌、卵巢癌、肺癌等细胞增殖、转移，诱导细胞凋亡和自噬发挥抗肿瘤作用[5-8]。课题组前期也开展了齐墩果酸在体实验，发现药物抑制H22肝癌细胞增殖，通过线粒体途径诱导细胞凋亡[9]，但由于齐墩果酸不溶于水和油，限制了药物吸收和生物利用度,本实验制备齐墩果酸自微乳开展离体实验研究。

1 实验材料

1.1 细胞株

人肝癌SMMC-7721细胞购于武汉博士德生物公司(编号：CX0296)。

1.2 药品与试剂

齐墩果酸(美伦生物公司，编号：MB6817)、顺铂(Sigma公司，编号:MKBV3446V)；蓖麻油(阿拉丁试剂公司，编号：8001-79-4)、吐温80(天津市富宇精细化工有限公司，批号：20140901)、蓖麻油聚氧乙烯醚(麦克林公司，编号：61791-12-6)、PEG400(天津市光复精细化工研究所，批号:20131112)、 四甲基偶氮唑蓝(MTT，Sigma公司，编号：M-2128)；AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡检测试剂盒(碧云天公司，编号：C1062)；Bcl-2、Bax和GAPDH抗体(Abcam公司，编号分别为ab182858、ab32503和ab128915)，p-Akt(Ser473)和Akt抗体(CST, 编号为9272和4060)。

1.3 主要实验仪器

Multiskan MK3酶标仪、BDAira流式细胞仪、EVOS FL Auto倒置荧光显微镜、Wiggens磁力搅拌器、MX3000P Real-time PCR仪。

2 实验方法

2.1 制备齐墩果酸自微乳

齐墩果酸(OA)与蓖麻油、吐温80、蓖麻油聚氧乙烯醚、PEG400(20:16:34:30)混合，OA的浓度为30 mg·g-1。将其置于50 ℃水浴中温和搅拌直至药物完全溶解，呈白色黏稠液体；……