任 松，刘雯菲，尚锦秀

全球每年有超过60万人死于结直肠癌(CRC)，CRC的高病死率与肿瘤转移特别是肝转移密切相关。据报道，近25%的CRC患者初诊时存在转移，其中约50%最终会发生转移[1]。为改善CRC患者的总体生存期，迫切需要在转移性CRC中寻找新的生物学标志物并及时给予干预措施。微小RNA(miRNA)通过与信使RNA(mRNA)的3-URT区结合，诱导mRNA降解或抑制转录后翻译，其表达改变或功能障碍在肿瘤发生和转移过程中发挥关键作用[2]。miR-4775是CRC转移的危险因素，通过激活转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad7信号级联反应促进CRC细胞的侵袭和转移[3]。值得注意的是，CRC组织中miR-196a水平显著高于邻近正常结直肠黏膜，与CRC患者淋巴结转移和不良预后有关[4]。同时，miR-196a可以促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭[5]。上述研究表明，miR-196a参与了CRC的病理过程，但其在CRC中的调控机制还有待进一步阐明。富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域3(LRIG3)的染色体位于12q13.2区域，该区域是许多肿瘤最常见的基因缺失位点。研究表明，LRIG3基因在多种恶性肿瘤中低表达，但在CRC中的研究较少[6]。本研究通过检测miR-196a在CRC组织中的表达，评估其对HCT116细胞增殖和侵袭的影响。

1 材料与方法

1.1主要试剂与仪器 HCT116细胞(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)；RPMI-1640培养基和胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司)；Lipofectamine2000转染试剂盒、miR-196a inhibitor和miRNA阴性对照(miR-NC)(上海吉凯生物公司)；Trizol试剂盒(美国Qiagen公司)；mRNA逆转录试剂盒和荧光定量PCR试剂盒(美国Promega公司)；四噻唑蓝(MTT,美国Amresco公司)；细胞蛋白抽提试剂盒(碧云天生物技术研究所)；LRIG3、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和β-actin抗体(美国Santa Cruz公司)；……