刘琳 李晶莹 曹丽丽 杜俊蓉

(1.四川大学华西药学院，四川 成都 610041；2.成都大学基础医学院，四川 成都 610106)

小胶质细胞是大脑神经系统的固有免疫细胞。在脑缺血发生后，小胶质细胞迅速向损伤部位迁移，通过释放炎性介质加重神经炎症，进一步加重缺血后的脑损伤[1-2]。大量研究表明，小胶质细胞的过度激活在脑缺血炎症反应中发挥关键作用[3-4]。但是，目前基于神经炎症的干预策略均未能实现临床转化。自然杀伤细胞活化受体(Natural killer group 2 member D，NKG2D)是C型凝集素样受体NKG2家族的重要成员，主要表达于NK 细胞、NKT 细胞、CD8+αβT 及部分γδ T等多种免疫细胞[5-6]。NKG2D可识别多种配体，这些配体属于主要组织相容性复合体I类分子相关蛋白(MHC-Ⅰ)以及另一类MHC-I类相关分子ULBP[7-8]。研究表明，NKG2D配体是参与各种炎症反应的应激诱导分子[9]。感染或炎症刺激上调NKG2D配体表达，与NKG2D结合后，通过接头蛋白DAP10传递活化信号，激活下游PI3K和GRB2进而引发免疫炎症反应[10-11]。但是，目前尚未见NKG2D与脑缺血后小胶质细胞炎症反应的相关性报道。氧葡萄糖剥夺(Oxygen-glucose deprivation，OGD)是体外诱导缺血性损伤的常用模型[12]。本实验通过建立小鼠海马HT22 神经元细胞OGD模型，进一步检测HT22-OGD上清刺激小鼠BV2小胶质细胞后NKG2D信号通路的变化和炎症反应，以探究NKG2D在脑缺血后小胶质细胞炎症反应中的潜在作用。

1 材料与方法

1.1 主要材料和仪器 小鼠海马神经元HT22细胞系、BV2小胶质细胞系(广州吉妮欧生物科技有限公司)，DMEM培养基、Cell Counting Kit-8试剂(Wako)，TNF-α小鼠ELISA 试剂盒(达科为生物技术有限公司)。iMark 酶标仪(Bio-Rad)，BDS200 倒置生物显微镜(重庆奥特光学仪器有限责任公司)，Micro Drop 超微量分光光度计(BIO-DL)，LightCycler®96实时荧光定量PCR仪(Roche)。……