丁贤华，张丽萍，费 璇,朱 强，张金华，任仙樱，吴志刚*，姜程曦*

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温郁金法呢基焦磷酸合酶（CwFPPS）基因的克隆、亚细胞定位及表达分析

丁贤华1, 2，张丽萍1#，费 璇1,朱 强3，张金华4，任仙樱5，吴志刚1*，姜程曦1*

1.温州医科大学药学院，浙江 温州 325035 2.安徽江南生物技术研究中心，安徽 池州 247100 3.安徽济人药业有限公司，安徽 亳州 236800 4.大理药业股份有限公司，云南 大理 671000 5.温州莪金医药有限公司，浙江 乐清 325600

克隆温郁金萜类生物合成中的限速酶法呢基焦磷酸合酶（farnesyl pyrophosphate synthase，FPPS）的全长cDNA序列。根据温郁金转录组数据设计特异引物，PCR扩增FPPS全长cDNA序列并对其进行生物信息分析；构建“基因-GFP”融合表达载体，利用农杆菌介导烟草叶片进行亚细胞定位分析；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测基因在植物组织中的特异性表达。温郁金基因全长1196 bp，包含1个长为1071 bp的开放阅读框，编码356个氨基酸，GenBank登入号为MT489462；编码蛋白属于类异戊二烯生物合成酶超级家族（C1）成员，包含5个保守的功能域，其中2个是富含天冬氨酸（DDXXD）的活性中心；亚细胞定位显示该蛋白位于泡质、细胞膜或细胞核上。qRT-PCR分析表明，基因在根茎中特异表达，相对表达水平是叶片中的13.7倍。克隆获得的温郁金基因全长及其特异表达信息，可为后续进行基因功能鉴定及倍半萜成分的代谢工程研究提供依据。

温郁金；法呢基焦磷酸合酶；克隆；亚细胞定位；表达分析

温郁金Y.H.Chen et C.Ling 为姜科姜黄属多年生草本植物，是我国传统道地药材，其根茎、块根采用不同炮制方法可制成临床上常用的“温莪术”“片姜黄”和“温郁金”3味中药，具行气化瘀、清心解郁、利胆退黄等功效[1]。……