宋丽影 李雨艳 周婷婷 路放

（吉林金域医学检验所有限公司 吉林长春 130000）

1 前言

方法学性能验证是指为确保实验室开展的检测项目中，所应用的检测系统的分析性能或检测项目的方法学能够满足检测及临床要求，进行的一项质量保证工作，只有通过性能验证才能开展相关工作。HBV-DNA定量（实时荧光定量PCR方法）是分子实验室中最常见的一种项目。本文以HBV-DNA定量检测为例，对如何进行分子诊断定量项目的分析性能验证进行简要分析。

2 材料与方法

2.1 标本来源

HBV-DNA标本（吉林金域医学检验所有限公司）；正确度验证室间质评样本（国家卫生健康委临床检验中心，吉林市临床检验中心）；重复性精密度和中间精密度验证高低值室内质控品（北京康斯坦彻）。

2.2 仪器

实时荧光定量PCR仪（ABI7500）；DP-1OOO提取仪（上海科华生物技术有限公司）；5424R高速冷冻离心机（Eppendorf）。

2.3 试剂

乙型肝炎病毒核酸测定试剂盒（磁珠/PCR-荧光探针法，国械注准20193401792，试剂批号20031611，上海科华生物技术有限公司）。

2.4 方法

2.4.1 正确度验证

使用已经通过室间质评的20例样本进行验证，计算出每个样本的偏倚百分比，偏倚百分比=（测量值-理论值）／理论值×100%。留样再测判断标准：按照项目稳定性要求，选取能够覆盖测量区间的最长期限的5个样本，其中至少4个样本的测量结果偏倚＜±7.5%。

2.4.2 精密度验证

（1）重复性精密度：选取高低值质控品，在同一次实验中重复检测高低值质控品各20次，记录结果并计算均值、标准差和变异系数CV（%）。以能力验证／室间质评评价界限（靶值±0.4对数值）作为允许总误差（TEa），重复性精密度＜3／5TEa（TEa=0.4Lg），即为通过。……