杨柳青 方晓红 王如烨 陈 赟 沈 丹 杜婷婷 章 勤#

1 浙江中医药大学附属杭州市中医院 浙江 杭州 310007

2 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053

何氏养巢方在何氏祖传经验方——育麟方的基础上优化而成，多年临床应用显示其能显著改善卵巢储备功能减退（DOR）患者的卵巢功能。本研究在前期研究基础上，进一步观察何氏养巢方对DOR小鼠超排卵及卵母细胞质量的影响，为中医药在辅助生殖领域的运用奠定基础，为DOR不孕症提供更完善的治疗方法。

1 材料与方法

1.1 实验动物：6～8周龄SPF级C57BL/6J雌鼠24只、雄鼠2只，购自上海西普尔必凯实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（沪）2018-0006，饲养于浙江中医药大学动物实验研究中心。

1.2 主要药品：每剂何氏养巢方由天冬、当归、柏子仁、菟丝子、肉苁蓉、覆盆子、白芍各10g，葛根20g组成，经浙江省中医药研究院制备成含生药3.6g/g的浸膏。脱氢表雄酮（DHEA）（商品名：NUGORON，产地：中国香港，批号：DN165152）。

1.3 主要试剂与仪器：环磷酰胺（CTX）、M16培养液、KSOM培养液购自Sigma公司，瑞氏-姬姆萨染色液购自上海源叶生物科技有限公司，小鼠抗人八聚体结合转录因子4（OCT4）单克隆抗体购自Abcam公司，孕马血清促性腺激素（PMSG）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）购自宁波第二激素厂，Nikon牌荧光显微镜，二氧化碳培养箱（上海天能科技有限公司），Olympus牌体式显微镜，恒温烤箱（上海精宏实验设备有限公司）。

1.4 分组与造模：将雌鼠按随机数表法分为对照组（Control），DOR组，DHEA组，何氏养巢方低、中、高剂量组（Low-HSYC、Mod-HSYC、High-HSYC），每组4只。除对照组外，其余组予90mg/kg CTX腹腔注射建立DOR模型。

1.5 用药：根据体表面积换算法[1]，何氏养巢方成人每天剂量90g，以标准剂量的0.5、1、2倍分低、中、高浓度进行灌胃，给药量分别为 3.25g/kg·d-1、6.5g/kg·d-1、13g/kg·d-1浸膏；……