陈加飞，黄丽华，李 晶

（重庆市巴南区人民医院药剂科，重庆 401320）

肺动脉高压（PAH）是慢性阻塞性肺疾病（COPD）的并发症[1]，其特征是血管增生和小肺动脉重塑，导致肺血管阻力逐渐增加，并最终导致心室衰竭和死亡，未经治疗的患者平均生存期为2.8年[2-3]。安立生坦化学名为（+）-（2 S）-2-[（4，6-二甲基嘧啶-2-基）氧基]-3-甲氧基-3，3-二苯基丙酸，是由美国雅培公司研发的用于治疗PAH的选择性内皮素受体A（ERA）拮抗剂，能抑制内皮素在PAH发病机制中的作用，有效降低PAH发生率[4-5]。2007年6月由美国食品药物管理局（FDA）批准上市，商品名为Letaris，用于口服治疗PAH。杂质合成及控制贯穿于药品研发和生产的整个过程[6-7]。蒋清伟等[8]采用高效液相色谱（HPLC）法测定安立生坦强制降解有关物质A，B，C，D，E，F。陈立云等[9]采用HPLC法测定安立生坦中对映异构体杂质。吴国顺等[10]报道了安立生坦的异构体杂质。刘志友等[11]报道了安立生坦的4，6-二甲基-2-（2，2-二苯基-乙烯氧基）嘧啶杂质。陈保来等[12]报道了安立生坦杂质Z1，Z2，Z3，Z4，DP1。陈雷霖等[13]采用液相色谱-质谱联用法鉴定安立生坦中10个有关物质。王博等[14]采用HPLC法测定了安立生坦片中7个杂质。但均未报道安立生坦的氧化杂质（S）-2-[（4-羟甲基-6-甲基嘧啶-2-基）氧基]-3-甲氧基-3，3-二苯基丙酸，且无该杂质的市售对照品。因此，建立安立生坦原料药及其制剂的质量标准具有重要意义。本研究中以2，4-二氧代戊酸乙酯和S-甲基异硫脲硫酸盐为原料药，经环化、还原、羟基保护、氧化得到2-甲磺酰基-4-（叔丁基-二甲基-硅烷基氧基）-6-甲基-嘧啶（化合物Ⅵ），再与（S）-2-羟基-3-甲氧基-3，3-二苯基丙酸甲酯合成目标化合物Ⅰ。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

BRUKER AVANCEⅢHD 400型核磁共振仪，BRUKERAPEXⅣFTMS型质谱仪（德国布鲁克公司）；大龙MS-H-Pro+型加热磁力搅拌器（北京大龙公司）。

1.2 试药

S-甲基异硫脲硫酸盐（批号为C12025028），2，4-二氧代戊酸乙酯（批号为C12043031），硼氢化钠（NaBH4，批 号 为C12028063），叔 丁 基 二 甲 基 氯 硅 烷（TBSCl，批号为C12035137），4-二甲氨基吡啶（DMAP，批号为C12020132），间氯过氧苯甲酸（mCPBA，批号为C12020138），均为分析纯，购于上海麦克林生化科技有限公司；乙醇（批号为2020030201），二氯甲烷（DCM，批号为2020012802），碳酸钾（K2CO3，批号为2020011301），二甲基甲酰胺（DMF，批号为2020011801），氢氧化钠（批号为2020012201），乙腈（ACN，批号为2020012501），盐酸（批号为2020012201），石油醚（批号为2020011701），乙酸乙酯（批号为2020012501），氯化铵（NH4Cl，批号为2020030201），无水硫酸钠（批号为2020010801），均为分析纯，购于成都市科隆化学品有限公司；（S）-2-羟基-3-甲氧基-3，3-二苯基丙酸甲酯（武汉欣欣佳丽生物科技有限公司，批号为2019121301，分析纯）；柱层析硅胶（青岛硕远硅胶科技有限公司，200～300目）。

2 方法与结果

2.1 化合物Ⅵ的合成

合成路线见图1。将2，4-二氧代戊酸乙酯（15.8 g，0.10 mol）和S-甲基异硫脲硫酸盐（18.8 g，0.20 mol）溶于乙醇（200 mL），控温70℃，搅拌，过夜。反应结束后，浓缩至干，再经硅胶柱层析分离纯化[石油醚-乙酸乙酯（10∶1，V/V）]，得类白色针状固体Ⅲ（13.3 g，62.7%）。将化合物Ⅱ（13.3 g，0.063 mol）溶于乙醇（200 mL），冰浴下分批加入NaBH4（1.8 g，0.048 mol），加毕于室温下搅拌，过夜。反应完毕，向反应液中加入饱和NH4Cl溶液50 mL，淬灭反应，旋干。依次用水（50 mL）和DCM（50 mL×3）萃取，经无水硫酸钠干燥后抽滤，滤液减压蒸出溶剂，得油状物Ⅳ（7.8 g，72.7%）。将化合物Ⅳ（7.8 g，0.046 mol）和DMAP（11.2 g，0.092 mol）加入DCM（200 mL），搅拌，溶解后慢慢滴入TBSCl（16.0 g，0.11 mol），滴毕，升温至45℃，反应3 h。反应完全后，加水（100 mL）淬灭，用乙酸乙酯（100 mL×2）萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压蒸出溶剂，所得剩余物经硅胶柱层析石油醚-乙酸乙酯（75∶1，V/V）分离纯化，得固体化合物Ⅴ（12.0 g，91.7%）。将化合物Ⅴ（12.0 g，0.042 mol）溶于200 mL DCM中，慢慢加入mCPBA（15.8 g，0.092 mol），室温搅拌，过夜。反应完全后，向反应液中加水50 mL，搅拌30 min，用饱和的K2CO3溶液调pH至7，经乙酸乙酯（100 mL×3）萃取，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压蒸出溶剂，所得剩余物经硅胶柱层析石油醚-乙酸乙酯（6∶1，V/V）分离纯化，得固体化合物Ⅵ（12.0g，90.3%）。

图1 2-甲磺酰基-4-（叔丁基-二甲基-硅烷基氧基）-6-甲基-嘧啶（化合物Ⅵ）合成路线Fig.1 The synthetic process of 2-methyl sulfonyl-4-（tertiary butyl-dimethyl-silankyloxy）-6-methyl-pyrimidine（compoundⅥ）

2.2 化合物I的合成

合成路线见图2。将化合物Ⅶ（4.0 g，14.0 mmol）、化合物Ⅵ（4.2 g，13.3 mmol）和K2CO3（1.9 g，13.7 mmol）加入DMF（50 mL）中，搅拌，升温至90℃，过夜。反应完毕，倾入冰水（100 mL）中，乙酸乙酯（200 mL×2）萃取，有机相用饱和食盐水（50 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后经硅胶柱层析[石油醚-乙酸乙酯（20∶1，V/V）]分离纯化，得白色固体化合物Ⅷ（5 g，71.9%）。将化合物Ⅷ（5 g，9.6 mmol）溶于ACN（30 mL）和水（10 mL）中，加入NaOH（0.5 g，12.5 mmol），室温下搅拌，过夜。反应完毕，将反应液转移至冰浴下，搅拌下滴加1 mol/L盐酸调pH至1，滴毕后室温下搅拌1 h，减压蒸出溶剂，所得剩余物经硅胶柱层析[石油醚-乙酸乙酯（5∶1，V/V）]分离纯化，得固体化合物Ⅰ（1.4 g，37.0%）。

图2 （S）-2-[（4-羟甲基-6-甲基嘧啶-2-基）氧基]-3-甲氧基-3，3-二苯基丙酸（化合物I）合成路线Fig.2 The synthetic process of the impurity（S）-2-[（4-hydroxymethyl-6-methylpyrimidin-2-yl）oxy]-3-methoxy-3，3-diphenylpropanoic acid（compound I）

2.3 结构确证

以2，4-二氧代戊酸乙酯和S-甲基异硫脲硫酸盐为初始原料药，经环化、还原、羟基保护、氧化得到中间体化合物Ⅵ，再与（S）-2-羟基-3-甲氧基-3，3-二苯基丙酸甲酯合成目标化合物Ⅰ（化学纯度为99.1%，色谱图见图3），并经MS，1H-NMR，13C-NMR进行结构确证。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz），δ：12.57（s，1H，COOH），7.19-7.35（m，10H，ArH），7.13（s，1H，PyH），6.14（s，1H，CH），5.59（s，1H，OH），4.44（t，2H，PyCH2OH），3.38（s，3H，OCH3），2.40（s，3H，CH3）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz），δ：173.47，169.80，168.99，162.80，142.59，141.38，127.77，127.68，127.16，126.96，111.17，83.10，77.64，63.15，53.01，23.68；ESI-MS，m/z：393.25[M-1]-。

图3 化合物I高效液相色谱图Fig.3 HPLC chromatograms of compound I

3 讨论

曾考察还原剂NaBH4，将化合物Ⅲ还原为化合物Ⅳ，加热、加速反应时产生氢气，存在一定安全隐患，故采取在室温温和条件下延长反应时间。化合物Ⅴ被氧化为化合物Ⅵ为该合成路线的关键点，常用氧化剂或氧化剂组合有mCPBA、过硫酸氢钾、过氧化氢和钼酸铵组合等。由于化合物Ⅴ脂溶性较好，水溶性较差，为了使反应体系为均相体系而有利于反应进行，选择了脂溶性相对较好的mCPBA为氧化剂，成功制备了化合物Ⅵ。

虽然合成路线较长，但原料药与试剂均易得，中间体基本为固体，易于控制和分离纯化，利于合成杂质。合成的安立生坦杂质Ⅰ纯度高，可作为对照品用于建立安立生坦原料药的质量标准和有关物质分析。