王克玮，武志伟，展振峰，徐丽兰，李海花，乔家运*

（1.天津师范大学生命科学学院，天津市动物多样性保护与利用重点实验室，天津 300387；2.天津农学院动物科学与动物医学学院，天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室，天津 300384；3.嘉吉饲料（天津）有限公司，天津 300000）

抗生素作为禽类饲料添加剂，其引起的细菌耐药性、药物残留等负面影响已受到多个国家重视。我国于2020 年7 月1 日起禁止生产任何含有促生长类药物饲料添加剂（除中药类）的饲料，寻找有效抗生素替代品成为研究热点。研究表明，在饲料中添加吸附磷酸、微囊化磷酸和吸附磷酸乳酸均可不同程度增强肉鸡小肠消化酶活性，而富马酸、甲酸和柠檬酸均具有降低有害微生物数量的功能[1]。植物精油含有酚类、萜类、醇类和醛类等多种化学成分。研究表明，饲料中添加含25%百里香酚和25% 香芹酚的植物精油可以提高肉鸡回肠绒毛高度/隐窝深度，降低炎症反应，增强特异性免疫应答[2]，百里香酚和香芹酚复合添加可以提高饲料转化效率，增加肉鸡体重[3]。但有关植物精油和酸化剂复合添加对肉鸡饲喂效果的研究相对较少，因此，本试验旨在探究复合饲料添加剂对肉鸡生长性能、血清生化指标、ND 抗体效价和肠道组织形态的影响，为其在肉鸡生产中的应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验设计 试验采取单因子试验设计，选取1 日龄、体重相近健康的科宝肉鸡1 344 只，随机分成4 组,每组12 个重复，每个重复28 只鸡，试验期42 d。基础饲粮以豆粕、玉米为主要原料，参考科宝饲养标准（2018）配制而成，其组成及营养水平见表1。抗生素组在基础饲粮中添加10 mg/kg 恩拉霉素，试验组在基础饲粮中分别添加0.8、1.0、1.5 g/kg 复合饲料添加剂。

表1 基础饲粮组成及营养水平（风干基础）

恩拉霉素是质量分数为4%的市售预混剂；复合饲料添加剂(普乐吉吉酸)是由植物精油与有机酸组成，购自嘉吉动物营养（南宁）有限公司，原料组成成分及产品成分分析保证值为：肉桂醛（0.5%～2.0%）、百里香酚（0.5%～1.0%）、香芹酚（0.2%～0.5%）、丁香酚（0.05%～0.2%）、柠檬酸（≤15.0%）、水分（≤12.0%）等，载体为麦饭石。

试验于2020 年5 月16 日在天津汉沽某肉鸡厂进行，采用3 层笼养方式饲养，鸡笼规格为0.7 m×0.7 m×0.4 m（长×宽×高）。试验前清洗水槽、料槽等所需工具，并对鸡舍进行清洗与消毒，试验第1～14 天，每笼饲养不超过14 只，试验第15 天将肉鸡进行分笼，每笼饲养不超过7 只。

饲养管理严格按照鸡场相关管理规范进行。鸡舍温度第1～2 天控制在34～36 ℃，第3～4 天控制在32～33 ℃，之后每过2 d 降低1 ℃，直至舍内温度达到28℃左右。1～7 日龄每天24 h 光照，8 日龄后光照时间为23 h:1 h（L:D）；自由采食和自由饮水，定期打扫鸡舍，进行常规免疫。每天盘查鸡只数量，注意鸡只是否存在腹泻情况，对死亡鸡只进行记录并统计饲料情况。

1.3 样品采集 分别于试验第14、第28、第35 天和第42 天，每组随机选取6 只体重相近的健康肉鸡，分离十二指肠、空肠以及回肠组织，用生理盐水冲洗肠道内容物后置于4%多聚甲醛溶液中保存；并于试验第14、第28 天和第42 天，同时以颈静脉采血的方式采取血液15 mL 于离心管中，分离血清，置于-20℃储存，用于血清生化指标和ND 抗体效价检测。

1.4 测定指标及方法

1.4.1 生长性能 试验第1、第14、第28、第35、第42 天，分别以重复为单位进行空腹称重，并于试验第14、第28、第35、第42 天，以重复为单位记录采食量。根据肉鸡体重及采食量变化计算1～14 日龄、15～28、29～35、36～42 日龄的平均日增重、平均日采食量以及耗料增重比。

1.4.2 血清生化指标与ND 抗体效价测定 血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶活性采用GLAMOUR-3000 全自动生化分析仪测定，试剂盒为中生北控生物科技股份有限公司产品。ND 抗体效价采用血凝抑制试验方法测定，疫苗为天津瑞普生物技术股份有限公司提供。

1.4.3 肠道组织形态 肠道组织在4%多聚甲醛溶液中固定，固定好的肠段经修整、脱醛、脱水、透明和石蜡包埋，制成厚度约为5 μm 的切片，采用苏木精-伊红（HE）进行染色，用中性树脂进行制片后通过显微镜进行形态观察，并测量出绒毛高度、隐窝深度，计算绒毛高度/隐窝深度。

1.5 统计分析 使用Excel 2016 和SPSS 21.0 软件对试验数据进行统计分析，试验数据采用平均值± 标准差表示，采用单因素方差分析（One-way ANOVA）对试验数据进行差异显著性分析，P<0.05 表示差异显著，P<0.01 表示差异极显著。

2 结果与分析

2.1 复合饲料添加剂对肉鸡生长性能的影响 由表2 可知，42 日龄时，各组平均体重无显著差异。1～14 日龄时，1.0 g/kg 复合饲料添加剂组的平均日增重比抗生素组、1.5 g/kg 复合饲料添加剂组提高了4.89%（P<0.05）、5.54%（P<0.05），与0.8 g/kg 复合饲料添加剂组无显著差异。29～35 日龄时，0.8 g/kg 复合饲料添加剂组的平均日增重比1.0、1.5 g/kg 复合饲料添加剂组分别提高了8.23%、9.50%（P<0.05）；15～28 日龄与1～42 日龄时，各组平均日增重没有显著差异。

表2 复合饲料添加剂对肉鸡生长性能的影响

29～35 日龄时，0.8 g/kg 复合饲料添加剂组的平均采食量比1.0 g/kg 复合饲料添加剂组提高了6.62%（P<0.05），其余各组间平均采食量无显著差异；36～42 日龄时，0.8 g/kg 复合饲料添加剂组的平均采食量比1.0、1.5 g/kg 复合饲料添加剂组分别提高了7.61%（P<0.01）、5.79%（P<0.05），其余各组间无显著差异；1～14、15～28 日龄与1～42 日龄时，各组平均日采食量无显著差异。

1～14 日龄时，1.0 g/kg 组料重比与0.8、1.5 g/kg 复合饲料添加剂组相比均降低了3.88%（P<0.05），其余各组间无显著差异；15～28 日龄时，1.0 g/kg 复合饲料添加剂组料重比与抗生素组、0.8 g/kg 复合饲料添加剂组、1.5 g/kg 复合饲料添加剂组相比分别降低了4.79%、4.14%（P<0.01）、3.47%（P<0.05）；29～35 日 龄时，各组料重比无显著差异；36～42 日龄时，1.0 g/kg复合饲料添加剂组的耗料增重比与0.8 g/kg 组相比降低了8.11%（P<0.01）；1～42 日龄时，1.0 g/kg 复合饲料添加剂组耗料增重比与抗生素组、0.8、1.5 g/kg 复合饲料添加剂组相比均降低了4.00%（P<0.01）。

2.2 复合饲料添加剂对肉鸡血清生化指标的影响 由表3可知，14 日龄、28 日龄及42 日龄时，各组谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶与磷酸脱氢酶活性无显著差异。

表3 复合饲料添加剂对肉鸡血清生化指标的影响 U/L

2.3 复合饲料添加剂对肉鸡ND 抗体效价的影响 由表4可知，14 日龄时，各组ND 抗体效价无显著差异。28日龄时，抗生素组ND 抗体效价比0.8、1.0、1.5 g/kg复合饲料添加剂组分别降低了42.83%、46.60%、46.60%（P<0.05）。42 日龄时，抗生素组ND 抗体效价比0.8 g/kg复合饲料添加剂组提高了70.27%（P<0.05），其余各组间ND 抗体效价无显著差异。

表4 复合饲料添加剂对肉鸡ND 抗体效价的影响 lb

2.4 复合饲料添加剂对肉鸡肠道组织形态的影响

2.4.1 复合饲料添加剂对肉鸡十二指肠形态的影响 由表5 可知，14 日龄与35 日龄时，各组十二指肠绒毛高度、隐窝深度与绒毛高度/隐窝深度没有显著差异。28 日龄时，各组绒毛高度无显著差异，1.0 g/kg 复合饲料添加剂组的隐窝深度比抗生素组、0.8、1.5 g/kg 复合饲料添加剂组分别降低13.39%、14.30%（P<0.05）、19.44%（P<0.01）；0.8、1.5 g/kg 复合饲料添加剂组的绒毛高度/隐窝深度比1.0 g/kg 复合饲料添加剂组分别降低了15.80%（P<0.05）、21.58%（P<0.01）。42 日龄时，1.0 g/kg复合饲料添加剂组绒毛高度/隐窝深度比抗生素组、1.5 g/kg复合饲料添加剂组分别提高20.00%（P<0.05）、17.80%（P<0.05）。

表5 复合饲料添加剂对肉鸡十二指肠形态的影响

2.4.2 复合饲料添加剂对肉鸡空肠形态的影响 由表6可知，42 日龄时1.0 g/kg 复合饲料添加剂组绒毛高度/隐窝深度比1.5 g/kg 复合饲料添加剂组提高了26.06%（P<0.05），其他日龄各处理组间的绒毛高度、隐窝深度、绒毛高度/隐窝深度均无显著差异。

表6 复合饲料添加剂对肉鸡空肠形态的影响

2.4.3 复合饲料添加剂对肉鸡回肠形态的影响 由表7 可知，14 日龄与28 日龄，各组绒毛高度、隐窝深度和绒毛高度/ 隐窝深度没有显著差异。35 日龄时抗生素组隐窝深度比1.5 g/kg 复合饲料添加剂组降低了13.17%（P<0.05），抗生素组绒毛高度/ 隐窝深度比1.5 g/kg复合饲料添加剂组提高了18.89%（P<0.05）。42 日龄时，1.0 g/kg 复合饲料添加剂组绒毛高度/隐窝深度比0.8 g/kg 复合饲料添加剂组提高了34.39%（P<0.05）。

表7 复合饲料添加剂对肉鸡回肠形态的影响

3 讨 论

3.1 复合饲料添加剂对肉鸡生长性能的影响 酸化剂可以降低肉鸡胃肠pH，提高肉鸡肠道消化酶活性与养分消化吸收率。研究表明柠檬酸能增强肉鸡肠道对病原体的免疫能力、提高生长性能[4]。植物提取物具有维持肉鸡肠道菌群平衡，提高肉鸡肠道消化酶活性与消化吸收能力等作用。有报道指出在饲料中添加香芹酚可以降低肉鸡肠道沙门氏菌属和大肠杆菌微生物数量，提高肠黏膜中蔗糖酶与乳酸酶活性，增强肉鸡肠道屏障功能，从而提高肉鸡的生长性能[5]；添加百里香酚可以提高麻花鸡与罗斯肉鸡的平均日增重，降低耗料增重比，提高鸡只的生长性能[6-7]。本试验结果表明，复合饲料添加剂可以提高肉鸡的生长性能，这与以上研究结论相同。原因可能是复合饲料添加剂中的香芹酚与百里香酚可以提高肉鸡胰蛋白酶与α-淀粉酶的活性，提高肉鸡十二指肠和回肠微生物相对丰富度，增强蛋白质消化吸收与氨基酸代谢途径[8-9]；也可能是二者对内源性消化酶具有刺激作用，增加肠道吸收表面积[10]，促进肉鸡肠道对营养物质消化吸收，从而提高肉鸡生长性能。

3.2 复合饲料添加剂对肉鸡血清生化指标的影响 当机体组织受损时，细胞膜通透性增加，导致血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性升高[11]。研究表明在饲料中添加含有百里香成分的复合精油可以降低肉鸡血清中谷丙转氨酶活性[12]。本试验结果表明，不同浓度的复合饲料添加剂均具有降低肉鸡血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性的作用，但差异不显著，这与Reis 等[13]在肉鸡饲料中添加百里香酚、香芹酚和肉桂醛的研究结果一致。原因可能是复合饲料添加剂中柠檬酸可以通过加快成骨细胞代谢活动降低血清中谷丙转氨酶活性[14]。乳酸脱氢酶是一种广泛分布于各种生命系统细胞中的酶，参与细胞糖代谢，催化乳酸和丙酮酸与NAD+/NADH 辅酶系统的相互转化，当机体细胞（如肝细胞）受损时，血清中乳酸脱氢酶活性会大幅度升高[15]。本试验结果表明，不同浓度的复合饲料添加剂均具有降低肉鸡血清中乳酸脱氢酶活性的作用，但差异不显著。原因可能是复合饲料添加剂中百里香酚和香芹酚可以提高肉鸡小肠中促炎细胞因子IL-1β、TNF-α的分泌[16]，降低机体组织损伤程度。血清中碱性磷酸酶是一种在碱性条件下具有很高活性的酶，可以在应激条件下通过分解糖原与脂肪为机体供能,研究表明在偏热环境（20～32℃）条件下，肉鸡产生应激反应后血清碱性磷酸酶活性会显著升高[17]。本试验中各组碱性磷酸酶活性没有显著差异，活性很高的原因可能是环境温度偏高导致[17]，具体原因还需要进一步研究。

3.3 复合饲料添加剂对肉鸡ND 抗体效价的影响 血清中ND 抗体效价可以体现出机体免疫功能的强弱，ND 抗体效价越高，动物机体免疫能力越强。有报道指出植物精油可能通过调节Nrf2 信号分子影响抗氧化酶基因表达，提高动物机体内抗氧化酶活性，降低动物机体氧化损伤，提高免疫能力[18]。在饲料中添加含有百里香酚和香芹酚活性的牛至油可以提高肉鸡新城疫抗体免疫效价，增加免疫器官重量，增强肉鸡机体免疫能力[19]。本试验结果表明复合饲料添加剂可以提高肉鸡ND 抗体效价，增强肉鸡免疫能力，原因可能是复合饲料添加剂中含有的多酚类植物提取物（如百里香酚）可以提高雏鸡胸腺细胞和脾细胞增殖，从而提高雏鸡免疫应答；也可能是通过避免雏鸡B 细胞、巨噬细胞受到氧化应激所产生过量自由基的影响，从而发挥更好的免疫功能[20-21]。

3.4 复合饲料添加剂对肉鸡肠道组织形态的影响 肉鸡主要是通过肠道吸收营养物质，因此肠道组织形态对吸收养分具有很大的影响。绒毛高度、隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度可以反映肠道吸收功能，其中提高绒毛高度/ 隐窝深度能够反映肠黏膜结构的完善[22]。研究表明在肉鸡日粮中添加肉桂醛可以显著提高肉鸡肠道绒毛长度，促进肠道发育[23]。以百里香和茴香脑为主要成分的植物精油可以提升肉鸡空肠绒毛表面积，增强吸收营养物质能力[24]。日粮添加柠檬酸可以显著增加肉鸡十二指肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度[25]，有机酸可以改善肉鸡肠道健康状况、提高氨基酸与营养物质的利用率[26]。本试验结果表明，复合饲料添加剂可以提高肉鸡肠道绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度，降低隐窝深度，促进肠道发育。原因可能是复合饲料添加剂中的百里香酚和香芹酚可以促进肉鸡消化道内皮层的成熟，加快肉鸡肠道绒毛内皮的更新[27]，也有可能通过膜穿孔和膜结合方式快速提高肉鸡肠道中细菌细胞膜通透性及渗透压，导致细菌细胞内外物质交换加强并改变细菌细胞酶系统，增强对有害菌抑制作用[28]，还有可能是含有百里香酚和香芹酚的多酚类植物提取物可以提高肉鸡抗氧化能力，减轻氧化应激对肉鸡肠道造成的负面影响，降低肉鸡肠道损伤程度，维持肠道对营养物质吸收和消化的正常功能[29-30]，从而促进肉鸡肠道组织形态发育。

4 结 论

本试验结果显示，复合饲料添加剂对肉鸡生长性能、血清生化指标、ND 抗体效价和肠道组织形态具有促进作用，当其添加量为0.8 g/kg 时效果接近恩拉霉素饲喂效果，添加量为1.0 g/kg 时效果优于恩拉霉素。