刘 兰,张东雪,朱荣芳,梁向楠,李 晖,张胜雷(河北医科大学第四医院肾内科,石家庄 050011;通讯作者,E-mail:lei06352511@126.com)

血管钙化是引起心脑血管疾病发生甚至死亡的重要危险因素[1]。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡是引发血管钙化的众多机制中重要的机制之一[2]。高磷血症是引起血管钙化的始动因素,高磷可使VSMCs钙化[3,4]。赖氨酸甲基转移酶SET8可甲基化非组蛋白TWIST、p53等,参与调控细胞凋亡、增殖等[5,6]。干扰SET8基因表达可促进VSMCs发生钙化[7]。但SET8在VSMCs钙化中的研究较少,通过何种机制起作用尚不明确。鉴于此,本研究以大鼠VSMCs为模型,探讨SET8在大鼠VSMCs钙化中的作用及机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

β-甘油磷酸购自美国Sigma公司;DMEM培养液及胎牛血清均购自美国Gibco公司;RNA提取及反转录试剂盒均购自美国Thermo Fisher公司;实时荧光定量PCR试剂购自广州易锦生物技术有限公司;SET8质粒选自广州复能基因有限公司;茜素红S染料购自北京索莱宝有限公司;钙含量测定试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司;SET8、AKT及Caspase-3抗体选自英国Abcam公司;p-AKT购自美国Cell Signaling Technology公司。

1.2 实验模型的制备与分组

取4周龄清洁级、体质量约80-100 g的雄性SD大鼠(选自河北医科大学,编号:1305090)。体外分离大鼠胸主动脉,采用组织贴壁法,将组织块贴于瓶底,进行原代培养,传代至第3-4代,为验证高磷在血管平滑肌细胞钙化中的作用,将血管平滑肌细胞分为两组:①正常组:DMEM完全培养基;②高磷组(HP):完全培养基中加入10 mmol/L β-甘油磷酸。

为进一步验证SET8的调控作用,将血管平滑肌细胞分为6组:①正常组:完全培养基;②空……