冯金鑫，张瑞琴

(1.山西医科大学药学院，太原 030001；2.山西医科大学第二医院药学部，太原 030001)

铜绿假单胞菌(PA)对多种抗菌药物表现为固有或获得性耐药，在呼吸科和ICU感染率较高，免疫力低下患者易被感染[1]。近年来，由于临床诊疗手段的提高以及抗生素的不合理使用，使多重耐药PA的分离率增加[2]。研究表明，PA的耐药机制包括产生抗生素灭活酶或修饰酶[3]、外膜的渗透性降低及通道蛋白缺失[4]、形成生物膜及主动外排系统[5]等。主动外排泵在PA的耐药机制中起重要作用，在所报道的外排泵中，MexAB-OprM的作用尤为明显，其具有广泛的底物特异性，会造成PA对多种类型的抗生素天然耐药[6]。本课题组采用实时荧光定量PCR (RT-PCR)法检测临床分离多重耐药PA外排泵表达情况,探讨多重耐药与外排泵之间的关系，同时检测调控基因mexR、nalC和nalD，观察基因突变与表达之间的关系，以期为临床治疗提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1仪器 Cytation酶标仪(美国 Biotek公司)；DYY-7C型电泳仪(北京市六一仪器厂)；荧光定量PCR系统(美国Applied Biosystems公司)。

1.2试药 哥伦比亚血琼脂培养基(济南百博生物技术股份有限公司)；外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰(Sigma公司)；抗菌药物头孢他啶、头孢哌酮舒巴坦、氨曲南、亚胺培南、阿米卡星和环丙沙星，均购自中国食品药品检定研究院；Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒、柱式细菌总RNA抽提纯化试剂盒，均购自生工生物工程(上海)股份有限公司。

1.3菌株来源 收集2018年7月～2019年7月山西省太原市3所综合性医院分离的多重耐药PA 31株。……