吴 凯,任 强

(淮北矿工总医院心胸外科,安徽淮北 235000)

食管癌是临床常见的恶性肿瘤,近年来,食管癌发病率逐年上升,基因异常表达、致癌信号通路的激活等均可促进食管癌的发生[1]。 miRNA 属于非编码单链小RNA 分子,其可通过与靶基因结合从而调控靶基因表达,miRNA 异常表达可影响多种肿瘤发生及发展[2]。 既往研究显示miRNA 表达上调或下调均可能参与食管癌发生及发展过程,并可通过调控靶基因表达从而影响食管癌细胞增殖、凋亡等生物学行为[3-5]。 miR-338-3p 在胃癌组织中表达下调[6]。 生物信息学分析显示WNK1 可能是miR-338-3p 的靶基因,研究表明WNK1 表达量升高并可能促进肾癌发生及发展[7]。 但miR-338-3p 是否可通过靶向WNK1 影响食管癌发生发展过程尚未可知。 因此,本研究通过检测食管癌细胞系中miR-338-3p、WNK1 的表达,探讨 miR-338-3p 对食管癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及二者的靶向关系。

1 材料和方法

1.1 细胞

人正常食管上皮细胞株Het-1A、人食管癌细胞Eca-109、EC-1、EC9706 购自美国 ATCC 公司。

1.2 主要试剂与仪器

DMEM、胎牛血清、青霉素、链霉素、Opti-MEM减血清培养基购自美国 Gibco 公司;miR-338-3p mimics、miR-con、si-WNK1、si-con、anti-miR-338-3p、anti-miR-con 购自上海吉玛制药技术有限公司;qRTPCR 试剂盒(20181203)购自北京天根生化科技有限公司;MTT(20181116)购自上海泽叶生物科技有限公司;细胞凋亡试剂盒(APOAF MSDS)购自美国Sigma 公司;双荧光素酶活性检测试剂盒购自北京索莱宝;兔抗人WNK1 抗体购自武汉友联特生物技术有限公司;兔抗人 PCNA、MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase-3 抗体购自美国 Santa Cruz 公司;StepOnePlus 实时荧光定量PCR 仪购自美国ABI 公司;FACS Calibur 流式细胞仪购自美国BD 公司。

1.3 实验方法

1.3.1 细胞转染及实验分组

取对数生长期……