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绒毛白蜡FvSAP1基因的克隆与分析及表达载体的构建

2021-11-12臧真荣燕丽萍王因花吴德军

山东林业科技 2021年5期
关键词:植物

李 丽,臧真荣,燕丽萍,王因花,吴德军

(山东省林业科学研究院山东省林木遗传改良重点实验室,山东济南250014)

自然环境中非生物胁迫比如盐碱、干旱、低温等会影响植物的正常生长,植物往往通过抗逆相关基因的表达并经过体内一系列复杂的生理生化反应来抵御和适应外界环境的变化[1-2],因此抗逆基因的表达是植物抵御外界不利因素、增强自身适应性的关键所在。许多研究证实植物抗逆基因的表达受某些锌指蛋白调控,且锌指蛋白发挥着重要作用[3]。因此可通过构建逆境相关锌指蛋白基因的植物表达载体,将基因转入植物体内,使其蛋白产物在逆境胁迫下过表达从而达到从分子水平提高植物抗逆性的目的。锌指蛋白序列中的组氨酸(His)与半胱氨酸(Cys)能和锌离子结合形成锌指结构,锌指结构与DNA 双链大沟或蛋白结合后参与基因表达的转录调控。TFIIIA 是首次发现的具有此功能的锌指蛋白[4],随后人们发现各种动植物或其他物种体内存在锌指蛋白。根据蛋白中半胱氨酸(Cys)和组氨酸(His)的排列顺序,锌指蛋白被分成C2H2、C8、C6、C3HC4(RING 型)、C2HC 等类型[5]。本研究所克隆的锌指蛋白属于A20/AN1 型锌指蛋白,该蛋白具有A20或(和)AN1 型锌指结构。A20 锌指由一个或多个串联C2C2 锌指结构组成; AN1 锌指的结构模式是C-X4-C-X(9-12)-C-X(1-2)-C-X4-C-X2-H-X5-H-X- C 或者C-X2-C-X(9-12)-C-X(1-2)-C-X4-C-X2-H-X5-H-X-C,其中X 代表任意氨基酸[6]。OsSAP1(Oryza sativa subspecies indica stress-associated protein1)是在植物中首次发现的具有AN1 与A20 锌指结构域的蛋白,在烟草中过量表达OsSAP1 后,转基因烟草对逆境的耐受性得以提高[7]。后来有更多研究证明非生物胁迫应答与A20/AN1 锌指蛋白相关,因此具有A20/AN1 结构的蛋白被研究者命名为逆境相关蛋白SAPs(Stress associated proteins)[8]。……

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