杨康兵，赵树鑫，李方慧，陈丽梅，李昆志

(昆明理工大学 生命科学与技术学院，云南 昆明 650500)

0 引 言

14-3-3蛋白是烟草细胞中一组高度保守的酸性二聚体蛋白质，调节着许多重要细胞生命活动，如新陈代谢、细胞生长发育、细胞的存活和凋亡以及基因转录[1].很多研究发现14-3-3基因的转录、翻译及其与靶蛋白的相互作用可对非生物胁迫产生应答[2-3].14-3-3蛋白对烟草中的碳和氮代谢有广泛的调控作用[4-5]，14-3-3蛋白通过与碳代谢途径关键酶如蔗糖磷酸合酶[6]、脂肪氧化酶[7]互作影响这些酶的活性，从而影响光合产物的形成.因此，14-3-3蛋白已成为研究烟草组织代谢的重要靶点[8].如何灵敏、快捷地检测烟草14-3-3蛋白具有非常重要的意义.

目前,蛋白印迹分析(Western Blot，WB)手段被广泛用于检测烟草14-3-3蛋白[9-11]，但是WB操作较为繁琐、时间过长、灵敏度低而达不到理想效果[12].近年来，基于纳米金材料具有导电性好、催化活性高和高电子密度特性等优势，开发出辣根过氧化物酶等一些抗体酶偶联纳米金作为电化学传感器的信号探针，纳米修饰材料在电化学领域中得到广泛应用[13-14].同时，电化学传感器在生物蛋白检测结果中显示出更高的灵敏度和检测效率，在检测生物蛋白等标志物中已得到应用[15].

本研究将多壁碳/金纳米管(WCNTs/AuNs)修饰丝网印刷工作电极表面，然后将14-3-3抗体结合到多壁碳/金纳米管上，再加入检测14-3-3蛋白，最后加入纳米信号探针(Anti-14-3-3-Au-CAT)形成夹心免疫传感器.信号探针上的过氧化氢酶CAT催化底物 H2O2形……