杨 曼，谭 薇，刘 畅

0引言

视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells，RGCs)是视网膜的唯一输出神经元，对于视觉功能和昼夜节律至关重要[1]。RGCs及其视神经轴突神经退行性改变是引起严重视觉损害的多种疾病的基础，探索RGCs的病理改变和简单高效的RGCs体外原代培养模型的建立尤为重要。

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)可导致严重的视力丧失。有研究已经证实，在DR发展早期，没出现视网膜微血管病变之前就已经出现糖尿病性视神经病变[2-3]。因此，探索DR早期视网膜神经元的变化对DR的病理发生发展过程有着重要意义。与糖尿病动物模型实验相比，在体外建立原代RGCs高糖模型，不仅可以排除机体可能存在的其他干扰因素，还可以更直观地观察高糖诱导特定阶段的RGCs的变化。RGCs为高度分化细胞，不会增殖，所以只能进行原代培养，使得RGCs体外培养难度加大。目前针对RGCs细胞培养方法以及高糖处理的细胞模型建立仍十分有限，本文旨在通过体外实验探索出更为简单有效的RGCs细胞培养方法以及高糖处理的细胞模型建立，为研究DR导致的RGCs病变体外细胞建模提供一定基础。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1实验动物实验中使用的所有新生(1～3d)SD大鼠均由遵义医科大学实验动物中心提供，实验SD大鼠饲养湿度：50%～65%，温度：20℃～25℃，环境安静，避免强光照射,通风换气：每小时8～12次，雌雄不限，符合国家医用动物使用标准，SPF级，遵守《ARVO眼科和视觉研究中动物的使用声明》并通过《遵义市第一人民医院动物伦理审查》。

1.1.2主要试剂磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline，PBS)、L-谷氨酰胺、4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)均购于美国Sigma公司；……